富硒G3菌与牛初乳复配对小鼠免疫功能的影响和G3菌保藏方法初探-生物学；微生物学专业论文.docx

摘要 摘要 I I 摘 要 本文对本实验室筛选出的沼泽红假单胞菌 G3 菌株进行耐硒驯化，提高 G3 菌对亚硒酸钠的耐受性，制备富硒 G3 菌，将富硒 G3 菌与牛初乳复配形成富硒 牛初乳，初步探讨了富硒牛初乳对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影响， 并初步研究 G3 菌保藏方法，为 G3 菌的保藏提供一种新的思路。 为了提高 G3 菌对亚硒酸钠的耐受性，首先对 G3 菌进行耐硒驯化，形成耐 硒 G3 菌。以分批补硒补料方式对耐硒 G3 菌进行培养，得到富硒 G3 菌。以紫 外分光光度法对富硒 G3 菌进行硒含量的测定，结果表明，富硒 G3 菌的总硒含 量为 875.033±17.176 μg/g，其中，有机硒含量为 847.423 μg/g，有机硒转化率为 96.845%。 通过将富硒 G3 菌与牛初乳按质量比硒：牛初乳=1:20000 的比例复配形成富 硒牛初乳。小鼠急性毒性试验表明，富硒 G3 菌、牛初乳、富硒牛初乳均属实际 无毒。 用环磷酰胺构建小鼠免疫低下模型，对免疫低下小鼠灌胃富硒 G3 菌、牛初 乳和富硒牛初乳， 30 d 后测定各组小鼠脏器指数、白细胞数、T 淋巴细胞阳性 率、血清 SOD 酶活性、全血 GSH-Px 酶活性，同时计算料重比。试验表明，富 硒 G3 菌、牛初乳、富硒牛初乳均能提高免疫低下小鼠对饲料的利用率，提高 SOD、 GSH-Px 酶活性，增强小鼠的免疫功能，其中富硒牛初乳高剂量组效果最为显著， 达到了空白对照组的水平。 对小鼠肝脏、肾脏及粪便进行硒含量的测定，结果表明，灌胃不同剂量的硒 均能提高小鼠组织内的硒含量，而粪便中硒含量虽有所提高，但与免疫低下模型 组相比，并无显著差异。 为了给 G3 菌的保藏提供一种经济有效的方法，同时也为 G3 菌的运输寻找 一种便捷的方式，本试验在液体 G3 菌中加入十二水合硫酸铝钾对 G3 菌进行絮 凝。通过测定絮凝率，确定十二水合硫酸铝钾的最佳加入量为每 L 菌液中加入 10%十二水合硫酸铝钾 60 ml。在絮凝后的 G3 菌中加入海藻糖作为保护剂，以 超细陶瓷粉为载体对 G3 菌进行吸附固定，形成粉末状的 G3 菌，分别放于常温、 4 ℃、-20 ℃保藏，每 2 个月对固定化保藏的 G3 菌进行有效活菌数的测定， 同 时，每 2 个月将固定后的 G3 菌按 15%的接种量接回培养基中，观察其生长情况。 结果表明，海藻糖对 G3 菌有较好的保护作用，G3 菌的有效活菌数与海藻糖的 加入量和保藏温度有关。在 G3 菌中添加海藻糖的量为 10 g/L，保藏温度为 4℃ 时能获得较好的保藏效果。 II II 关键词：沼泽红假单胞菌，硒，环磷酰胺，免疫，海藻糖，保藏 Abstract Abstract PAGE PAGE IV Abstract This article domesticated G3 screend by our laboratory to improve the domestication of selenium tolerance. We prepared selenium-enriched G3 and mixed it with bovine colostrumson to get selenium-enriched bovine colostrumson. We elaborately studied the effect of selenium-enriched bovine colostrumson on immune function in immunodepressed mice induced by cyclophosphamide，and studied the storage method of G3. In order to improve the domestication of selenium tolerance, we domesticated G3 by increase the selenium-concentration. By this way, we got G3 with selenium-tolerance. We cultivated G3 with selenium tolerance by fed-batch to get the selenium-enriched G3. The content of selenium in selenium-enriched G3 is determined by ultraviolet spectrophotometry method. The content of selenium is 875.033±17.176 μg/g, in wh