低血糖对缺氧心肌细胞内质网应激介导细胞凋亡的作用和机制研究-基础医学专业论文.docx

The Mechanism of Cardiomyocyte Apoptosis Induced by Endoplasmic Reticulum Stress after Hypoxia in Rat Myocardial Cells with Hypoglycemia Dissertation Submitted to North China University of Science and Technology in partial fulfillment of the requirement for the degree of Master of Medicine by Xie Jing ( Basic Medicine) Supervisor: Professor Duan Guoxian June, 2015 独 创 性 说 明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含 为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确 的说明并表示了谢意。 论文作者签名： 日期： 2015 年 6 月 10 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即： 已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送 交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全 部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交 流。 □作者及导师同意论文公开及网上交流的时间： □ √ 自授予学位之日起； □ 自 年 月 日起。 作者签名： 导师签名： 签字日期：2015 年 6 月 10 日 签字日期：2015 年 6 月 10 日 摘要 摘 要 华北 华北理工大学硕士学位论文 摘 要 目的 通过建立离体大鼠心肌细胞缺氧模型，观察低血糖水平对缺氧心肌细胞内 质网应激标志蛋白（GRP78/BIP）、内质网应激感受蛋白（PERK、ATF-6、IRE-1） 及凋亡信号分子（CHOP、Caspase-12）表达的影响，确定低血糖对缺氧心肌细胞 内质网应激介导的细胞凋亡的可能机制、作用靶点和信号通路，为进一步探索缺氧 状态下促进心肌细胞凋亡的危险因素及降低心肌细胞凋亡率提供新论点、新方向。 方法 以大鼠H9C2心肌细胞系D26-D29（第26-29代）作为实验细胞，通过调节葡 萄糖培养基浓度模拟人体血糖浓度，并于缺氧培养箱中培养以建立心肌细胞缺氧模 型 ， 依 据 随 机 原 则 将 细 胞 分 为 4 组 ， 分 别 为 ： 正 常 血 糖 不 缺 氧 组 （ SN 组 ） ： 18mmol/L糖浓度培养基、正常培养；正常血糖缺氧组（MN组）：18mmol/L糖浓 度培养基、缺氧培养；低血糖不缺氧组（SL组）：3mmol/L糖浓度培养基、正常培 养 ； 低 血 糖 缺 氧 组 （ ML 组 ） ： 3mmol/L 糖 浓 度 培 养 基 、 缺 氧 培 养 。 通 过 采 用 Western Blot法和Real-time PCR法检测各组H9C2大鼠心肌细胞中内质网应激标志蛋 白（GRP78/BIP）、内质网应激感受蛋白（PERK、ATF-6、IRE-1）和凋亡信号分 子（CHOP、Caspase-12）的表达情况，从而探讨心肌细胞在缺氧状态下内质网应 激在细胞凋亡中所呈现的变化规律，以及低血糖对缺氧心肌细胞内质网应激介导的 心肌细胞凋亡的作用机制和途径。 结果 1 低血糖不缺氧组 GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP 及 Caspase- 12 蛋白的表达高于正常血糖不缺氧组，差别具有统计学意义(P0.05)；2 正常血 糖缺氧组 GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP 及 Caspase-12 蛋白的表达高 于正常血糖不缺氧组，差别具有统计学意义(P0.05)；3 低血糖缺氧组 GRP78/BIP、 PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP 及 Caspase-12 蛋白的表达高于正常血糖缺氧组，差 别 具 有 统 计 学 意 义 (P0.05) ； 4 在 基 因 表 达 方 面 ， 低 血 糖 缺 氧 组 GRP78/BIP mRNA、PERK mRNA、ATF-6 mRNA、IRE-1mRNA、CHOP mRNA 及 Caspase-12 mRNA 的表达均高于正常血糖缺氧组，差别具有统计学意义(P0.05)，这与该组 上述 6 种