钙离子浓度荧光显微检测系统中控制模块的设计-生物医学工程专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 1 PAGE 1 1 绪论 1.1 引言 细胞作为大多数生命体结构与功能的基本单位，主要由生物大分子、水、无机盐 和金属元素等等组成。钙元素是最为重要的金属元素之一，有“生命元素”之称。钙 元素在生物体内主要以游离钙离子(Ca2+)和钙的结合物等两种形式存在，结合物作为生 命体的组成部分，是动物骨骼与牙齿的重要成分；而 Ca2+是被称为偶联细胞内外的第 二信使，在细胞的生理调控中起着重要的作用[1]。Ca2+的信使功能是通过对 [Ca2+]i 的 调控来实现的，许多生命活动的产生和终止都是[Ca2+]i 变化的结果，因而实时、定量、 准确地检测 [Ca2+]i 显得十分重要[2]。 由于生命体特殊环境的限制，[Ca2+]i 的检测必须满足四个条件：⑴ 特异性强，生 物体内除了 Ca2+外，还有生物大分子、水、无机盐以及除钙以外的其它金属元素等等， 因而要求 Ca2+指示剂必须具有很强的专一性，只允许同 Ca2+结合而不会和其它物质结 合；⑵ 灵敏度高，胞内的主要成分是生物大分子与水，Ca2+的含量比较少，Ca2＋浓度 为百 nmol/L 量级，即使在胞内钙微区浓度也只有百 μmol/L 量级，因而要求测量方法 必须具有较高的灵敏度；⑶ 测量速度快，在测量过程中，必须确保[Ca2+]i 的检测速度 比 Ca2+信号引起的相关生理反应快；⑷ 细胞毒性小，所选用的荧光指示剂不严重妨碍 细胞的正常生理活动。 鉴于 Ca2+在细胞生理周期中的重要作用，已经有多种技术手段用于研究细胞及亚 细胞水平 Ca2+的活动机制。[Ca2+]i 的检测技术可以分为即光测量技术和非光测量技术 两种，其中光测量技术通过荧光探针对 Ca2+进行标记，结合现代先进的荧光技术和显 微镜技术，实现对[Ca2+]i 的检测，而非光测量技术主要是利用 Ca2+的离子特性完成对 [Ca2+]i 的检测，常用的方法有电生理和 Ca2+选择性电极等[3]。光测量技术相对于非光测 量技术而言，具有更好的时间相关性，操作简单，生物毒性低等优点，已成为活细胞 中 [Ca2+]i 的重要检测手段。然而，在实际的应用中，还没有一种方法能够解决所有样 本中[Ca2+]i 的检测，任何一种技术都有它的优点与局限性，因而在测量时，需要选择 合适的检测手段。 能够用于光测量技术测量的 Ca2+荧光指示剂的种类繁多，选择一种满足需求的 Ca2+荧光指示剂显得尤为重要，直接决定了样本中[Ca2+]i 检测准确度。根据不同的分类 标准，Ca2+荧光指示剂可以分为多种类型，其中比较常见的是依据 Ca2+荧光指示剂的 激发光谱特性，可以将其分为单波长 Ca2+荧光指示剂和双波长比值 Ca2+荧光指示剂。 本论文所描述的 Fura-2 就是双波长比值 Ca2+荧光指示剂的典型代表。 1.2 课题研究背景与意义 目前，国外已有成型的设备采用此方式用于定量地检测 [Ca2+]i，比如德国 TILL 公司开发出的 Polychrome 系列单色光源及其控制处理软件 Till vision，该系统利用单色 光源技术和高灵敏光电二极管弱荧光检测技术实现了对胞内 Ca2+的长时间监测[4]。此 外，德国 HEKA 公司的 PatchMaster 等软件中包含有胞内钙离子浓度监测软件包[5]。 在国内，华中科技大学生物物理与化学研究所将已开发出的膜片钳系统结合 MLS-1 单色光源控制系统[6]及其相关控制软件共同组成光电联合检测系统[7]，其中包含 有[Ca2+]i 的检测。本论文的主要工作是对光电联合检测系统中单细胞内钙离子浓度的 荧光显微检测部分作进一步的测试与维护，使得整套光电联合检测系统能够安全、稳 定地工作。 1.3 本文内容简介 本文主要论述的是钙离子浓度荧光显微检测系统中控制模块的进一步设计与测 试，重点是对现有开发控制系列软件的测试与升级，其中包括氙灯单色光源控制系统 应用程序接口函数的设计及应用软件的设计、新一代数据采集系统 UDA2 的测试与其 应用程序接口的设计和钙离子浓度荧光显微检测软件的设计，最后对 USB 外设通讯的 常见故障进行总结分析，并提出了相应的解决方案。 本文的主要内容如下： 第二章首先介绍了 Fura-2 双波长比率法检测[Ca2+]i 的基本原理，接着从钙离子浓 度荧光显微检测系统的宏观架构出发，对钙离子浓度荧光显微检测系统中控制模块的 作用以及本课题的主要工作内容进行简单的介绍，最后概述本所自行开发的 MLS-1 系 统的整体架构以及工作原理，并详细介绍 MLS-1 系统应用程序接口与应用软件的设计 过程。 第三章将 UDA2 与 UDA1 数据采集系统进行对比，针对 UDA1 的