镉预暴露增加NIH3T3细胞对双酚A诱导的DNA氧化损伤敏感作用的研究-公共卫生专业论文.docxVIP

重庆 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 BPA 英文全称 Bisphenol A 中文全称 双酚 A CdCl2 CCK-8 LMA NMA μm μM °C μl ml h PBS TBST DMSO EDTA PVDF Cadmium Chloride Cell counting Kit-8 Low melting point agarose Normal melting point agarose micrometer Micromole/litre Centi-degree microliter millilitre hour Phosphate-buffered solution Tris Buffered Saline Tween Dimethyl sulfoxide Ethylene Diamine Tetraacetic Acid Polyvinylidene Fluoride 氯化镉 细胞计数试剂盒 低熔点琼脂糖凝胶 正常熔点琼脂糖凝胶 微米 微摩尔/升 摄氏度 微升 毫升 小时 磷酸盐缓冲液 洗膜缓冲液 二甲基亚砜 乙二胺四乙酸 聚偏二氟乙烯 TEMED N,N,N,N-Tetramethylethylenediamine N,N,N,N-四甲基二乙胺 AP Ammonium persulfate 过硫酸铵 SDS DAPI PI DNA DNase RNaseA Sodium dodecyl sulfate 4,6-diamidino-2-phenylindole Propidium iodide deoxyribonucleic acid deoxyribonuclease Ribonuclease A 十二烷基硫酸钠 二脒基苯基吲哚 碘化丙啶 脱氧核糖核酸 脱氧核糖核酸酶 核糖核苷酸酶 A 1 Tail DNA % Percentage of DNA in the tail 彗尾 DNA 百分含量 TL Tail length 彗星尾长 TM Tail moment 尾矩 OTM Olive tail moment Olive 尾距 2 镉预暴露增加 NIH 3T3 细胞对双酚 A 诱导的 DNA 氧化 损伤敏感作用的研究 摘要 目的：氯化镉（CdCl2）或双酚 A（BPA）均普遍存在于我们的日常 生活中，我们可以很容易的通过经口、呼吸等途径共同暴露于 CdCl2 与 BPA。以往研究发现低剂量或无毒剂量 CdCl2 浓度可能会增强其他 DNA 毒物比如γ-射线、苯并芘等对 DNA 的损伤作用。然而，目前尚未 见关于 CdCl2 与 BPA 复合暴露的毒性研究。本研究以无毒剂量 CdCl2 浓 度预处理 NIH3T3 细胞，再施以 BPA 处理，探讨预暴露镉对 NIH3T3 细 胞对 BPA 诱导的 DNA 氧化损伤的敏感性影响及其可能机制。 方法：取对数期生长的 NIH3T3 细胞铺板，贴壁后，处或不处以 5 或 10μM CdCl2 24h,然后再处或不处理 2、10、50μM 剂量的 BPA 24h。 共有 4 组：（1）正常对照组；（2）CdCl2 处理组：单独 5 或 10μM CdCl2 组；（3）BPA 处理组：单独 2、10 或 50μM 剂量的 BPA 处理组；（4）CdCl2 预处理+BPA 组：以 5 或 10μM CdCl2 预处理 24h,然后再处以 2、10、 50μM 剂量的 BPA 24h；BPA 处理 24h 后，分别用细胞计数试剂盒试剂 盒（CCK-8）检测细胞活力；LDH 细胞毒性检测试剂盒检测细胞 LDH 的 释放；碧云天活性氧检测试剂盒测定细胞 ROS 含量；碱性彗星实验检 测 NIH3T3 细胞 DNA 损伤，免疫荧光及 Western blot 检测γH2AX 的表 3 达；流式细胞术检测细胞周期的变化；TUNEL 荧光染色及 Western blot 检测细胞的凋亡及凋亡分子 PARP 的表达变化。 结果：○1 与正常对照组相比，单独 CdCl2 处理不引起细胞活力、LDH 释放、ROS 含量、彗星参数（Tail DNA%、TL、TM、OTM）、γH2AX 的表 达、细胞周期、TUNEL 阳性细胞数及凋亡分子 PARP 表达水平的改变 （P0.05)。 ○2 与正常对照组相比， 2μM 或 10μM BPA 单独处理不引起细胞 活力、LDH 释放、ROS 含量、彗星参数（Tail DNA%、TL、TM、OTM）、 γH2AX 的表达、细胞周期、TUNEL 阳性细胞及凋亡分子 PARP 表达水平 的改变(P0.05)；然而， 50μM BPA 单独处理与对照组相比，则引起 了细胞活力下降、LDH 释放增加