低分子柑橘果胶联合奥沙利铂对结肠癌细胞的协同杀伤作用及其分子机制的研究-外科学专业论文.docx

广州医学院硕士论文低分子柑橘果胶联合奥沙利铂对结肠癌细胞的协同杀伤作用及其分子机制的研究 广州医学院硕士论文 低分子柑橘果胶联合奥沙利铂对结肠癌细胞的协同杀伤作用及其分子机制的研究 PAGE PAGE 10 低分子柑橘果胶联合奥沙利铂对结肠癌细胞的协同 杀伤作用及其分子机制的研究 专 业：外科学 研究生：汪峰 导 师：刘海鹰 教授 中文摘要 背景 结肠癌是消化道最常见的肿瘤之一。近些年来，随着我国人民生活水平的提 高，生活习惯和饮食结构的改变，其发病率逐年上升，在所有肿瘤发病率中排名 第 3 位。1 更值得注意的是，我国结肠癌发病数已超过美国，且患者的中位发病 年龄比欧美提前约十年，青年患者比欧美多见。尽管现今结肠癌的治疗方式已取 得了长足的进步，但是其五年生存率并没有取得明显提高。 手术与化疗结合的综合治疗是目前结肠癌治疗的标准模式。对于无法进行根 治性切除或全身转移的中晚期患者，化疗不仅提高了手术治疗的效果，同时也改 变了不少过去被判为不治之症而束手待毙患者的命运。然而，传统化疗药物也存 在种种缺点：缺乏对正常细胞与肿瘤细胞的选择性，药物毒副反应等都限制了其 治疗强度和频率；又因其存在耐药问题，使得大多数患者的治疗难以为继。目前 的资料显示细胞毒化疗已经达到了治疗的平台期，现有化疗药物的重新组合难以 明显提高生存。 随着对肿瘤发生发展分子机制的进一步了解，发现了许多对肿瘤发生发展起 关键作用的信号分子或蛋白分子。在这些理论基础上，针对这些起关键作用的信 号分子或蛋白分子发展了靶向治疗。主要是通过特异性的阻断细胞的信号转导途 径，控制其基因的表达及改变生物学行为；或者通过阻断肿瘤血管生成，抑制肿 瘤细胞的生长和增殖，发挥抗肿瘤作用。实践已证明分子靶向治疗具有高选择性、 低毒性和高治疗指数，可长期用药。在表现出更强抗肿瘤活性的同时，亦减少对 正常细胞的毒副作用。这种有的放矢的治疗方法为肿瘤治疗指明了新的方向。此 外，口服靶向化疗药的出现使患者可以在家接受治疗，生活质量得以显著提升。 寻找新的作用靶点和针对这种靶点的高效、特异性化合物是目前抗癌工作者 的迫切渴望和受到广泛重视的研究课题。 低分子柑橘果胶（Low-Molecular-Weight Citrus Pectin，LCP）是一种从柑橘 类水果的果皮及果浆中提取出的水溶性多糖类化合物，在经过高 PH 及高温处理 后，能与肿瘤细胞表型的细胞亲和黏附，特异性杀伤并清除突变细胞。作为体内 半乳糖凝集素-3（galectin-3）配体的竞争性抑制剂，它能够封闭肿瘤细胞表面的 galectin-3 位点，阻止肿瘤细胞的形成与发展。其针对的 galectin-3 被称为“肿瘤 相关蛋白”，广泛分布于正常细胞及肿瘤细胞，参与调节细胞生长与分化，它几 乎与肿瘤形成、发展与转移的全过程密切相关。 奥沙利铂是结肠癌化疗的主要药物之一，属于新的铂类衍生物，是通过产生 烷化结合物作用于 DNA，形成链内和链间交联，从而抑制 DNA 的合成及复制而 起到抗肿瘤作用。但在前列腺癌体外实验中，铂类药物能促使细胞核内的 galectin-3 磷酸化并转运至胞浆内，胞浆内磷酸化 galectin-3 的高表达能抑制 Bad 的表达并使其磷酸化，稳定线粒体膜抑制细胞色素 C 释放，致使细胞凋亡受阻。 因此，胞浆内磷酸化的 galectin-3 可能是使铂类药物作用降低的原因之一。 既往的研究已证实 LCP 可以通过作用于 galectin-3 对不同的细胞凋亡关键蛋 白或关键途径发挥抗肿瘤效应。在与某些临床化疗药物联合应用的实验中，LCP 增加化疗药物诱导凋亡反应性的同时，亦能显著逆转肿瘤细胞对化疗的耐药。截 至目前为止，国内外尚无 LCP 与 Oxaliplatin 联用的文献报道。 根据：包含 Bcl-2 家族 NWGR 抗死亡基序的内源性 galectin-3，能抑制铂类 药物诱导的细胞凋亡。诱导 Bad 蛋白 112 位上的丝氨酸磷酸化，磷酸化的 Bad 活性降低，从而稳定线粒体膜电位，抑制细胞色素 C 释放和 caspase-3 激活，通 过内源性凋亡途径抑制凋亡作用的产生。LCP 能有效对抗 galectin-3 引起的抗凋 亡作用，从而增加铂类药物的化疗敏感性。 实验目的 本研究以 galectin-3 为靶点，通过体外实验进行以下研究：1) Oxaliplatin 单 药与 LCP+Oxaliplatin 联合用药分别对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响，进一步 从凋亡蛋白的表达和细胞周期深入探讨其抗肿瘤的机制 2）研究 LCP 对以铂类药 物为主的结肠癌化疗效果是否具有增敏作用并探讨其机制。 材料与方法 1、细胞株：人结肠癌细胞株 HCT116、HT-29。 2、MTT 比色法评价不同浓度