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阴茎勃起功能障碍基因治疗进展 　　勃起功能障碍(erectile dysfunction，ED)又称阳痿，指在性交时，阴茎勃起硬度不足以插入阴道或不能维持至射精。是较常见的男科疾病之一。目前，全世界ED患者约占成年男性人口的10％，英国和法国男性中度至重度ED的患病率达30％～40％，在中国40～70岁的男性人群ED发病率在50％以上。申素琪等对江苏省3552例中老年男性调查显示，勃起功能障碍患病率在26.1％以上。近20年来，人们对勃起功能障碍(ED)的病理生理学、诊断及治疗研究上有了很大进步，现已有多种治疗手段，但是所有的治疗方法都有一定的局限性，因此ED基因治疗的方法和途径将具有巨大的价值和潜力。本文将从靶基因、载体、实验研究等方面对近年来ED基因治疗进展作一综述。 　　 　　1 基因治疗的靶基因 　　 　　疾病发生的根源是由于基因发生异常改变.近年来因为分子生物学Northern、Western和Southern blotting印迹技术及多聚酶链反应等技术的应用，使目的基因及基因产物能够被识别、分离、测系、合成、克隆及体外表达，从而准确地推测出单个基因在细胞内所起的作用。目前可作为治疗的靶基因主要有以下几种：iNOS、eNOS、nNOS、BDNF、SOD、CGRP、RhoA、PDE5、PDE3A、Ang、TGF(TGF―Bl、TGF―B2、TGF－β3)、VEGF、COX-2、PGF2a等。但最有治疗价值的基因是那些在阴茎勃起中发挥主要作用的基因。 　　1.1 iNOS基因 阴茎勃起的分子机制是各种性刺激作用于阴茎海绵体中非肾上腺素能非胆碱能(NANC)神经的神经源性一氧化氮合酶(nNOS)及血管内皮细胞的内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)，后者分解L－精氨酸生成NO，NO刺激海绵体平滑肌细胞内的溶解型腺苷酸环化酶(sGC)，使三磷酸鸟苷(GTP)转化为第二信使eGMP，激活cGMP依赖性蛋白激酶I(cGKI)，平滑肌细胞内钙离子浓度降低，引起平滑肌舒张。勃起功能障碍通常被认为是阴茎神经末梢或内皮细胞NO合成下降所致，或是受NO诱导发生松弛反应的海绵体平滑肌顺应性受损的结果。因此iNOS基因可作为勃起功能障碍治疗中理想目的基因。 　　1.2 VEGF基因　血管平滑肌细胞分泌的VEGF作用于血管内皮细胞和平滑肌细胞上的受体(酪氨酸激酶)，后者使海绵体内NO浓度增加并诱发平滑肌舒张及阴茎勃起。血管性勃起功能障碍与血管内皮生长因子等密切相关，有人将取自鼠附睾脂肪垫的微血管内皮细胞以荧光染料PKH 26标记，而后将其注入该鼠的阴茎海绵体中，术后2～15 d切除阴茎观察，发现荧光标记的血管内皮细胞在全部7只鼠的双侧阴茎海绵体均有分布，显示了一种安全有效的基因转导方法。因此以它为靶基因的转基因治疗亦取得了一定的效果。 　　1.3 PDF.5基因 目前，利用RT―PCR法和Nothem Bolt分析法已发现人阴茎海绵体组织中有14种PDE的mRNA表达。人阴茎海绵体平滑肌细胞悬液中已分离出的PDE蛋白有PDE2、PDE3、PDE4和PDE5。大量临床资料证实，PDE5抑制剂(西地那非)可有效治疗勃起功能障碍，有研究表明在阴茎海绵体平滑肌细胞中降解环磷酸核苷(eNMP)的主要是PDE5。以逆转录病毒载体携带的PDE5mRNA反义核酸直接转导人阴茎海绵体，只抑制PDE5mRNA在海绵平滑肌细胞表达，从而降低PDE5的活性，增加平滑肌细胞cGMP浓度，促进海绵体平滑肌的舒张，增强阴茎的勃起，同时也避免了对其他组织、器官的不良反应。PDE5向阴茎海绵体组织转染靶向性好，在解决转染基因的降解问题之后，其应用会有良好前景。 　　另外，K通道、ca“通道、RhoA／Rho激酶系统、血管活性肠多肽(vasoactive intestinal polypep―tide，VIP)基因、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related pep―tide。CGRP)基因、血管紧张素转化酶基因(ACE)插入／缺失(ID)的多态性等也与勃起功能障碍的发病有关，也可选择作为目的基因。 　　 　　2 基因治疗的载体 　　 　　常用的基因转移方法有二类：病毒、非病毒载体法和理化方法。病毒载体包括腺病毒(AV)载体、腺相关病毒(AAVs)载体和逆转录病毒(RV)载体，非病毒载体有裸DNA、质粒DNA及脂质体。不同载体的基因转导效率不同，各有优势与不足。AV载体表达滴度高，极小量的病毒即能实现高效转导。不足之处是本身编码的蛋白免疫性较强，存在时间短；AAVs载体表达效率高，能转染多种细胞，可定点整合并减少插入突变的可能，属缺损型病毒，需辅助病毒存在方能进行有效复制和感染，不适合携带较长基因；RV载体是RNA病毒，能将外来基因整