第六讲药物制剂微生物学检查.pptVIP

第六章 药物制剂的微生物学检查 微生物与药学的关系密切 1、许多抗生素是微生物的代谢产物, 2、选用微生物来制造医药卫生方面广泛应用的药物,如维生素,辅酶； 3、药品卫生质量的控制需要进行微生物学检验； 4、药品和生物制剂应用生物工程技术生产时，采用工程菌进行，如：胰岛素、干扰素和生长因子等。 第一节 药物的抗菌试验 第二节 灭菌制剂的无菌检查 第三节 药物的微生物限度检查 第一节 药物的抗菌试验 药物的体外抗菌试验包括用于区别药物是抑菌或杀菌药物的抑菌试验；测定药物杀菌活性的杀菌试验；以及检查两种药物联合作用的联合抗菌试验等。 一般抑菌药物只能抑制微生物生长，不能杀死微生物，抑菌药物被除去，微生物又可以恢复继续生长。杀菌药物能杀死微生物，杀菌药物除去后，微生物仍然不能生长。 药物的抑菌作用或杀菌作用是在一定条件下相对而言的。在我们检测时，药物的作用受到用药时培养基的组成、温度、PH值及所用的菌种、菌量等各个因素有关。 一般我们在体外对药物进行测试后，有效的药再要进行体内试验，如果体内试验再次证实此药有效的话，才能推荐应用到临床。 一、药物的体外抑菌试验 （一）体外抑菌试验 药物的体外抑菌试验是常用抗菌试验方法，其中最常用的方法用连续稀释法和琼脂扩散法。 1、连续稀释法 包括液体培养基稀释法和固体培养基稀释法两种。均可以用来测定药物的最小抑菌浓度(MIC)。 MIC:是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度，通常用μg/ml或U/ml表示。 （1）液体培养基稀释法 在试管中用液体培养基进行2倍系列稀释药物，后在每一管中加入定量的试验菌液，经24~48h培养后观察结果。以能抑制试验菌生长的最低浓度为药物的MIC。 （2）固体培养基稀释法 平板法：测定多种细菌对同一药物的MIC 斜面法：较长时间培养的试验菌和霉菌。 2、琼脂扩散法 利用药物在琼脂培养基中扩散，并在一定浓度范围内抑制细菌生长的原理进行的。一般用于细菌和酵母菌的药敏试验。 （1）滤纸片法（纸碟法） 滤纸片法是最常用的方法，可在1个平板上测定多种药物对同一试验菌的抗菌作用；适用于新药的初筛试验（初步药物是否有抗菌作用）及临床的药敏试验（细菌药物第三性试验、以便选择用药）。 滤纸片分湿、干两种，可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在含菌的平板表面，也以预先做成一定浓度的干燥纸片。一般来说预先做成的干燥纸片实用一些而且准确一些。 一般药敏试验常采用滤纸片法，我们可以根据抑菌环的直径的大小，来判断菌种对药物的敏感性，是敏感(S)，中介(I)还是耐药(R)？ 国际标准采用K-B法：水解酪蛋白培养基和卡尺 1、棋盘格法 棋盘稀释法是常用的定量方法，首先分别测定拟联合的抗菌药物对检测菌的MIC。 药物最高浓度为MIC的2倍，对倍稀释。两种药物的稀释分别在方阵的纵列和横列进行，这样在每管（孔）中可得到不同浓度组合的两种药物混合液。接种菌量为5×105CUF／ml，35℃孵育18h~24h后观察结果。计算部分抑菌浓度（FIC）指数。 联合药物敏感试验和杀菌试验的意义 ①治疗混合性感染； ②预防或推迟细菌抗生素耐药性的发生； ③联合用药可以减少剂量以避免达到毒性剂量； ④联合用药比单一用药时效果更好。 2、琼脂扩散纸条法 将两种含药纸片贴于已涂布试验菌的MH琼脂平板表面，培养24h后观察结果。 培养后观察两药形成的抑菌区的图形来判断两药联合应用时，是无关、相加、协同还是拮抗作用（P148）。 二、药物的体内抗菌试验 药物的体内抗菌试验又称为动物试验治疗试验或保护力试验。 当抗菌药物进入机体后，其效力的发挥要受体内各种因素的影响。因此在评定新药的药效时除做体外抗菌试验外还需要做体内的抗菌试验。 设立对照组 三、影响抗菌试验的因素 1、试验菌：常用细菌、霉菌和酵母菌的标准菌 株；特殊情况下用分离株 （传代次数；对数期） 2、培养基：按各试验菌的营养要求进行配制，严格控制各种原料、成分的质量及培养基的配制过程；不能含有降低药物活性的成分或对抗物。 3、抗菌药物：药物的物理状态、浓度、稀释方法等都会直接影响抗菌试验的结果，必需精确配制。（均质；PH值为中性；中草药） 4、对照试验：为确保试验结果的科学性和准确性，试验时应同时进行各种对照试验。 试验菌对照-在无药情况下，应能在培养基内正常生长。 溶剂及稀释液对照-配制抗菌药物时所用的溶剂及稀释液均应无抗菌作用。 已知药物对照