[动物微生物学及免疫学]血清学反应.pptVIP

第十四章 血清学反应 血清学反应：抗原抗体在体外结合的反应，因实施反应的某些重要因素是含抗体的动物血清，故名血清学反应。 血清学反应具有严格的特异性和较高的敏感性，因此可用抗原或抗体的已知一方检测未知的另一方，作为传染病的辅助诊断和微生物的鉴定。 一、凝集反应 1、直接凝集反应： 细菌、红细胞等颗粒性Ag与相应Ig混合以后，在电解质参与下，经过一定时间Ag颗粒相互凝集形成肉眼可见凝集块。 参与凝集反应的Ag称凝集原，Ig称凝集素。 平板法和试管法 2、间接凝集反应 先将可溶性Ag或Ig吸附于一种与免疫无关的有一定大小的颗粒载体表面制成固相Ag或Ig，再与相应的待检Ig或Ag结合产生的反应。 分为两类： 间接血球凝集反应（HA） 间接血球凝集抑制反（HI） 间接血球凝集反应（HA） ＋ ＋ 阳性 间接血球凝集抑制反（HI） ＋ ＋ 阳性 阴性 二、沉淀反应 胶体状态的可溶性Ag（如细菌和寄生虫的浸出液、组织浸出液、培养滤液、动物血清等）与相应Ig混合后，经一定时间，形成肉眼可见的沉淀物。 临床上常用于诊断炭疽、梅素、鼠疫、猪丹毒、气肿疽等传染病。 沉淀反应分为以下三种： 1、环状沉淀反应（Ascoli反应） 实验管： 4mm小管 已知Ig 层叠未知Ag 交界面白色沉淀环 对照管： 4mm小管 已知Ig 层叠生理盐水 交界面无沉淀环 2、絮状沉淀反应： 将Ag和相应在试管内或凹玻片上混匀，经过一定时间性，出现肉可见絮状或颗粒状不溶性沉淀物为阳性。 如诊断梅毒的康氏反应，及用标准类毒素测定抗毒素血清效价的絮状试验等。 3、琼脂扩散试验 单相琼扩：将已知（1：10稀释），加入等量的1%琼脂（56℃）管（或平板）中，凝固后，于其上（打孔）加待检Ag（孔中），置37℃湿合感作，2-3h后可见白色沉淀带。 双相琼扩：1%琼脂凝胶制成平板后，在上面按设计图形打孔，在孔内分别加Ag和Ig，放密闭湿盒中，将使之双相扩散而形成沉淀带。 单相琼扩 双相琼扩 含已知Ig琼脂 被检血清（Ig） 待检Ag 已知Ag 三、补体结合反应 溶菌反应： 某些细菌（霍乱弧菌）与相应的抗体混合以后，如有补体参加，则细菌发生溶解的反应，称溶菌反应。 溶血反应： 红细胞与相应的抗体（溶血素）混合以后，如有补体以参加，则红细胞发生溶解的反应，称溶血反应。 补体的特点 1、补体是酶类物质，但均以无活性的前体形 式存在于血清中 2、动物血清中尤其以豚鼠血清含量最高，故 多用豚鼠的新鲜血清作为补体的来源 3、补体性质不稳定，易失活，经56度30分 处理即灭活 4、补体本身没有特异性能与任何一组抗原抗体复合物相结合，一但结合后不再游离。 5、补体不与单独的抗原或单独的抗体相结合。 补体结合反应的概念 补体结合反应（简称补反CFT）： 是指在补体参加下，以绵羊红细 胞（Ag）和抗绵羊溶血素（Ig）作为 指示系统的抗原抗体反应。 补体结合反应的原理 补反包括两个系统五种成分： 一是被检系统（溶菌系）中的已知Ag、待检Ig及仅供一组Ag-Ig系统反应的定量补体。 二是指示系统（溶血系）中的红细胞和溶血素。 首先是溶菌系统的抗原与抗体复合物与补体相互混合后产生的反应。 其次为了测知溶菌系统中补体是否被利用，再加入溶血系（绵红细胞和抗绵溶血素）作为指示系统，以观察因补体游离所产生的溶血情况。 如果反应的结果是不溶血为诊断阳性，发生了溶血为诊断阴性。 操作与结果 操练时，分两步进行： 将待检系统的Ag、Ig与补体三种成加入试管内，于37度水浴作用30分钟，然后加入指示系统，于37℃水浴作用30分钟，观察结果。 结果观察： 不溶血为诊断阳性，发生溶血为阴性 四、中和实验 病毒或毒