课件：特种蛋白的免疫测定及临床意义.ppt

特定蛋白的免疫测定方法 基本原理：免疫沉淀反应 免疫透射比浊 免疫散射比浊 免疫沉淀反应的发展历史 1897年，Kraus发现细菌培养液与其相应抗血清混合后出现肉眼可见的沉淀反应 1902年Ascoli建立了环状沉淀试验。 1905年Bechhold将抗体混溶在明胶中，然后再将相应特异抗原加于其上，抗原抗体的特异结合可在明胶中出现沉淀。 1946年Oudin报道了试管单向免疫扩散试验。（ 1965年Mancini又提出了平板单向免疫扩散试验。） Grabar和Williams在1953年报道了免疫电泳。（对流免疫电泳、火箭免疫电泳和免疫固定电泳） 上述为经典免疫沉淀试验发展阶段，测定范围窄（10 ~ 100 μg/ml）、灵敏度低，繁琐费时，不能自动化。 免疫沉淀反应的发展历史 1959年，Schultze等报道了透射比浊法（Transmission turbidimetry)。 1967年，Ritchie等报道了散射比浊法(nephelometry)。 1977年，Sternberg等进一步发展建立了速率散射比浊法(Rate nephelometry)。 免疫比浊测定方法与免疫沉淀方法相比，灵敏度高，重复性好，测定范围宽，已用于临床体液特定蛋白含量的测定，现已有多种自动化检测仪器应用于临床检验，尤其是免疫散射比浊测定。 免疫透射比浊 基本原理：一定波长光线通过抗原抗体反应混合液时，被其中的免疫复合物（IC）反射或遮挡、吸收而减弱。在一定范围内，透射光被吸收的量与免疫复合物的量呈正比，后者又与相应抗原和抗体的量呈函数关系。抗体量一定，即可从标准曲线获知抗原的量。 由于要求抗原抗体复合物的数量足够，并且颗粒要足够大（35~100nm），本法的测定灵敏度和准确度相对较低。 缺点： 免疫散射比浊 基本原理：光线通过检测溶液时，被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光。根据雷利散射公式，在一定条件下，透射光与微粒浓度成正比，散射光与微粒浓度成反比。 散射比浊可分为终点和速率散射比浊两种。 光源 荧光：高压汞灯发射，入射光波长（?）355nm，散射夹角（?）为90℃ 激光：氦氖灯，?=663nm，?=15~35℃ 碘钨光：碘钨灯，?=400~500nm，?=70℃ 免疫散射比浊仪器 得灵、贝克曼等 美国THE BIDING SITE –MINIPEPH 德国美创- D-dimer 武汉艾尔夫 深圳国赛 特定蛋白测定的临床意义 D-二聚体（D-dimer）: 生理学背景：纤维蛋白溶解系统——FDP 意义： 肺栓塞和深V血栓及A血栓的诊断 溶栓监测 胱抑素C 特定蛋白测定的临床意义 血液中含有多种功能蛋白，如载体蛋白、免疫球蛋白（抗体）、酶、凝血因子等，其含量变化通常与多种疾病有密切关系。 C反应蛋白 (CRP) 、免疫球蛋白及亚类、补体C3和C4、抗链球溶血素O (ASO) 、类风湿因子 (RF)、前白蛋白 (Prealbumin) 、白蛋白 (Albumin) 、微白蛋白 (Microalbumin) β2微球蛋白(β2Microglobulin) 、 α1抗胰蛋白酶 (α1AT) 、铜蓝蛋白 (Caeruloplasmin) 、结合珠蛋白 (Haptoglobin) 、转铁蛋白 (Transferrin) 、载脂蛋白A （APO-A1） 、载脂蛋白B （APO-B）等。 C反应蛋白 (CRP)-超敏CRP 是一种由肝细胞合成的急性时相反应蛋白，是在炎症和组织坏死疾病的急性期出现于病人血清中的一种糖蛋白，它能与肺炎双球菌的荚膜成分C-多糖蛋白质起反应，故称为C-反应蛋白。具有激活补体和促进粒细胞及巨噬细胞吞噬作用。 正常值为：800-8000μg/L。 CRP是急性时相反应的一个极为灵敏的指标，血浆中CRP浓度在急性心肌梗死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿癌浸润时迅速显著地增高，可达正常水平的2000倍。结合临床病史，有助于随访病程。 特别在炎症过程中，CRP可作为风湿病、系统性红斑狼疮、白血病等的随访指标。 细菌和病毒感染鉴别，细菌感染急性期一般均增高，病毒感染多数不变。 国外有研究认为，CRP是引发心脏病的最强烈的危险因素，其危险程度是血液中过量胆固醇的2倍。CRP含量高的人患高血压的危险率比胆固醇高的人大1倍。如果炎症和过高的胆固醇同时出现的话，那么患心脏病和中风的危险率比正常的人要高出9倍。由此可见，CRP含量高和患心脏病呈正相关。 此外，最近一项研究发现，血中高浓度的CRP是结肠癌发病的危险因素，并认为CRP可能是结肠癌的一个早期标志物。 免疫球蛋白及亚类 其浓度在不同年龄段有所差异，在某些疾病情况下，这些指标的浓