环境雌激素对三种雌激素反应性肿瘤细胞增殖的影响及其作用机制研究-营养与食品卫生专业论文-营养与食品卫生专业论文.docxVIP

yU{1人学博I论文：辛上摘要 环境雌激素对三种雌激素反应性肿瘤细胞 增殖的影响及其作用机制研究 中文摘要 目的： 观察环境类雌激素对三种雌激素反应性肿瘤细胞增殖的影响及其作用 机制研究。 方法： 使用五种环境类雌激素(大豆异黄酮、玉米赤霉烯酮、壬基酚、双酚A、 邻苯二甲酸二丁酯)和三种雌激素受体阳性的肿瘤细胞(MCF一7和T47D 人乳腺癌细胞、PE04人卵巢癌细胞)，从以下几个方面研究环境雌激素的 生物学效应及其作用机制： l采用MTT比色法、3H—YdR掺入法和流式细胞术从细胞增殖活力、 DNA合成和周期分布三个方面研究环境类雌激素对细胞增殖的影响。 2采用HE染色、流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳等检测手段，从形态学、 亚二倍体细胞比例和凋亡细胞DNA断裂片段的出现等三个方面研究环境 类雌激素对细胞凋亡的影响。 3采用免疫组化技术观察环境类雌激素对核增殖抗原PCNA、抗凋亡 蛋白Bcl．2和促凋亡蛋白Bax表达的影响，探讨这类化合物影响细胞增殖和 凋亡的分子生物学作用机制。 4采用RT-PCR技术观察环境类雌激素对c-myc、P53、TGF-B、ERa和 ERD、细胞色素P4501A1(CYPlAl)矛11 P450181(CYPlBl)mRNA表达的影 响，以探讨这类化合物生物活性的作用特点和作用机制。 5采用cDNA表达谱芯片技术检测膳食中常见的两种环境类雌激素GS  州川大学博L-论文：中文摘要 和ZEA对MCF一7细胞肿瘤相关基因表达的影响，以研究其对相关肿瘤发 牛、发展的关系。 结果： 1对细胞增殖的影响 (1)ZEA具有较强的雌激素(E2)活性(约为E2的十分之一)，在2 ×101 M浓度下即可产生雌激素样效应。NP、BisA和DBP的雌激素活性 比E2低得多(约为E2的千分之～)。这四种化合物在一定的剂量范围内均 能促进三种受试细胞增殖和DNA合成，激活静息期细胞(G0／G1)进入S 期和G2／M期，提高细胞增殖指数(P0．05)，并呈现良好的剂量一效应和 时间．效应关系。 (2)在32～96X10-6moi／L的浓度范围内，GS可有效抑制细胞增殖和 DNA合成，降低S期细胞比例，将细胞周期滞留在G2／M期(P0．05)。 GS能够降低S期细胞分布比例并使G2／M期细胞分布比例提高，提示GS 除了具有抑制细胞增殖的作用外还有一定促细胞分化作用。 2对细胞凋亡的影响 三种细胞在内源性雌激素耗尽并缺乏外源性雌激素的条件下(溶剂对 照组)，均出现典型的凋亡特征(凋亡小体的形成、DNA—ladder的出现及亚 二倍体细胞比值升高等)，表明所选择的细胞株对雌激素的反应是敏感的。 在此情况下，往培养液中分别加入32×10—9mol／LZEA、32X10。mol／LNP 及32×10-7mol／L BisA对细胞处理72 h，凋亡现象被明显抑制：凋亡细胞 所占比例明显下降，凋亡细胞特有的DNA．1adder消逝，HE染色显示细胞 呈活跃的增殖状态，显微镜下可观察到正处于各个分裂期的细胞。大于32 ×10—6mol／L GS可加重细胞的凋亡现象，使凋亡细胞所占比例显著增加。 DBP对细胞凋亡无明显影响，提示其对雌激素反应性细胞增殖的促进作用 可能是通过其它途径实现的。  叫川火学博Ij论文：中文摘要 3对核增殖抗原PCNA、Bcl．2及Bax蛋白表达的影响 (1)与溶剂对照组相比，ZEA、NP、BisA和DBP可促进三种细胞核增 蜻抗原PCNA和抗凋亡蛋白Bcl．2的表达并抑制促凋亡蛋白Bax的表达。 提示，影响PCNA、Bax／Bcl一2的表达是这类化合物调节细胞增殖和凋亡的 机制之。 (2)GS可促进Bmx的表达并抑制PCNA和Bcl．2的表达，提示GS抑制 细胞增殖和促进细胞凋亡的作用亦可能与PCNA、Bax／Bcl．2调节途径有关。 4对c-myc、p53、TGF—B3、ERa、ER]3、CYPlAI和CYPlBl mRNA 表达的影响 (1)ZEA、NP、BisA和DBP均能抑制细胞转化生长因子TGF-133mRNA 表达，上调细胞癌基因c—myc和抑癌基因p53 mRNA的表达；GS可促进 细胞转化生长因子TGF-133mRNA表达并抑制癌基因c—myc mRNA的表达， 但对p53的表达没有影响。此结果提示环境雌激素对细胞增殖和凋亡的影 响与TGF．B3和c-myc途径有着密切的关系，Gs的抗癌抑癌作用并不依赖 于p53途径。 (2)ZEA、NP、BisA和DBP可显著抑制三种细胞CYPlAl mRNA的表 达，但对CYPlBl的表达没有影响；GS对二者的表达都没有影响。由于 CPPIAI／CYPlBl比值在外源性化合物的激活及降解过程中起着重要的调 节作用，此结果亦提示环境类雌激素的生物效应亦可能与