环境毒物对酪氨酸羟化酶的影响-神经病学专业论文.docxVIP

摘要 环境毒物对酪氨酸羟化酶的影响 ／巾自金森氏病(PD)是常见的发生于申老年人的神经系统变性性疾 病!其病理改变主要是中脑黑质一纹状体多巴胺能神经元变性，引起酪氨 酸羟化酶蛋白(TH)显著减少，导致多巴合成降低。PD的发病机制 至今尚不明确。自本世纪80年代发现l一甲基一4·苯基一1，2，3，6-四氢吡 啶m口TP)可导致帕金森病样的表现后，环境毒物在PD发病机制中 的作用受到了重视。国内外临床流行病学的资料表明农村居住、种田、 饮用井水，一些杀虫剂和除草剂的暴露可使惠PD的风险明显增加， 尤其是有机氯农药的暴露。但至今尚没有一种环境毒物被肯定能引起 PD。 有机氯杀虫剂氧桥氯甲桥萘(Dieldrin)，它可在富含脂肪的组织 中储留数十年。而且在PD脑内能够检测到Dieldrin的存在。提示有 机氯杀虫剂Dieldrin与PD的发病有一定的关系，是一种潜在的致PD 物质，但到目前为止其确切的发病机制仍不明确。硫丹也是一种有机 氯农药。给山羊喂食硫丹后，可在山羊脑内测得硫丹存在，说明其可 透过血脑屏障而在脑内积聚。大鼠喂食硫丹后脑内多巴胺水平下降。 但目前对其与PD的研究较少． j 基于上述研究的结果，以及由于TH是多巴胺生物合成的第一限 速酶，在多巴胺合成中起重要的作用。因埘，本研究试图通过体外实验， 了解Dieldrin对培养的PCI2细胞的形态，增殖及吁h玎RNA和TH 活性的影响，以及通过体内实验了解Dieldrin对大鼠中脑THmRNA和 蛋白表达的影响，以进一步研究Dieldrin与PD的关系，并探讨其致PD 的可能机制．同时了解硫丹对体外培养的PCI2的形态，增殖及 THmRNA，TH蛋白表达和TH活性的影响，初步探讨其与PD的关系。 第一部分Dioldrin和硫丹对培养的PCI2细胞增殖，形态和酪氨 酸羟化酶mRNA及其活性的影响 (将PCI2细胞按3 x 105／孔接种于六孔板，培养24h后分成以下三 组：1)MPP+阳性对照组：浓度为1、10～、10。、10d、10一mmol／L。 21  Dieldrin加药组：浓度分别为l、10。1、10‘2、10一、10‘4mmol／L。3) 硫丹加药组：浓度分别为10一、0．06、O．03、10～、10一、104mmol／L。 每组设立相应空白对照组。上述空白对照组及各加药组均设6个复 样。放入5％C02，370C的温箱中培养24h后分别计细胞计数，用RT． PCR方法测定THmRNA的表达，以及周高效液相．电化学检测器检测 TH的活性。 结果显示： 1)lmmol／L浓度的MPP+与PCI2细胞孵育24h后，PCI2细胞数量 明显减少，约下降到对照组的45％(P0．01)。0．1mmol／L的Dieldrin 与PCI2细胞孵育24h后，PCI2细胞数量约下降到对照组的30％ (P0．01)，而lmm01／L Dieldrin与PCI2细胞孵育24h后，PCI2细 胞数量为0。0．06mmol／L和0 03mmol／L的硫丹与PCI2细胞孵育24h 后．PCI2细胞分别下降至对照的61．1％(P0．01)和30％(P0．01)。 O．1mmol／L的硫丹与PCI2细胞孵育24h后，PCI2细胞数为0。因此， 从细胞计数上可以看出一定浓度的Dieldrin和硫丹对PCI2细胞均具 有毒性作用，且其毒性作用大于MPP+． 2)当PC 12细胞与lmm01／L MPP+孵育24h后，THmRNA的表达下 降至对照组的50．5％(P0．01)。0．1mmol／L Dieldrin与PCI2细胞孵 育24 h后，THmRNA的表达下降至对照组的61．7％(P0．01)。当PC 12细胞与0．06mmol／L硫丹孵育24 h后，THmRNA的表达下降至对照 组的72 2％(P0．05)。因此，从对培养的PCI2细胞的THmRNA的表 达上可以看出一定浓度的Dieldrin和硫丹均能降低THmRNA的表达， 且其毒性作用大于MPP+． 3)当PC 12细胞与lmmol／L MPP+孵育24h后，TH活性下降至对 照组的74．85％(P0．05)．0．1nunol／L Dieldrin与PCI2细胞孵育24 h 后，TH活性下降至对照组的70．29％(P0．01)。当PCI2细胞与 0．06mmo儿硫丹孵育24 h后、TH活性下降至对照组的 74．7％(P0．01)。因此，从对培养的PCI2细胞的TH活性上可以看出 一定浓度的一Dielddn和硫丹均能降低TH活性，且其毒性作用大于 脚P．j 7 第二部分Dieldrin对大鼠中脑酪氨酸羟化酶mRNA和蛋白表达 的影响 f健康雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组，具体分组如下：实验 。 2  纽依据Dieldrin给药