高产酒率酿酒酵母单倍体的分离与杂交育种-微生物学专业论文.docxVIP

浙江大学硕l：毕业论文 高产酒率酿酒酵母单倍体的分离与杂交育种 摘 要 本文在筛选获得一批酒精发酵力较强的二倍体酿酒酵母(Sacchromyces cerevisiae)菌株的基础上，优化产孢条件，应用筛选获得的高产酒精的单倍体菌 株，经杂交育种构建高产酿酒酵母菌株。 以二倍体菌株ZJD3．3、ZJD3-4、ZJD3．7、ZJD3．9和ZJD3．11(称为ZJD3系 列)及非整倍体菌株C19为实验菌株，经对产孢培养基的优选，确认McClary产 孢培养基为适宜的高产孢率培养基。在该培养基上经25℃、7天培养，酿酒酵母 的产孢率可达到47％。对刁D3系列二倍体菌株进行单倍体分离，获得单倍体7l 株。对筛选所得单倍体菌株，以及实验室原有单倍体菌株c36、c36-8、c36-9进行 交配型和发酵性能测定，交配型为a型的单倍体与交配型为a的单倍体数目差异较 大。得交配型a的单倍体菌株30株，交配型a的单倍体菌株18株。从中筛选获得发 酵性能较强的单倍体菌株4株，其中1株为a型，3株为伍型，发酵性能最强的zs．5 菌株其同等条件下酒精发酵后的酒度高出二倍体亲株4．5％。 以得到的4株强发酵菌株和单倍体菌株c36、c36．8、c36-9以及非整倍体菌株 C19为杂交亲株，分别进行群体杂交，发现不同交配型单倍体混合2h后开始出现 哑铃型细胞，平板分离培养48h后，经鉴定共获得杂合子124株，经酒精发酵测验， 从中筛选获得发酵性能优良的酵母菌株6株。结果表明，95％以上的杂合子酒精 发酵性能优于杂交亲株，最优者比杂交单倍体亲株提高17．7％，比原始二倍体菌 株高15．5％。经杂交育种与重复酒精发酵测验，最终确认zj—l、zj一2、zj·3、zj-4、 zj．5、zi．6等6株高产酒精的菌株，为进一步选育构建超级工程菌株奠定了扎实基 础。 关键词：酿酒酵母，单倍体，杂交育种，杂合子，高产酒率  浙江大学硕L毕业论文 Study on Separation of Haploids from Diploid Cells of Saccharomyces cerevisiae and Hybridization Breeding of Strains with High Ethanol Production ABSTRACT On the basis of the work that we have got a group of hi曲ethanol production diploid and haploid Saccharomyces cerevlsiae strains，in order to improve the ethanol fermentation eapacity and select hi【gher ethanol production n蹦strains than them，we sL：】feen elite strains for ethanol fermentation by spore separation and hybddization breeding．Diploid Saccharomyces cerevisiae strailrls ZJD3．3、zJD3．4、ZJD3-7、 ZJD3-9 and ZJD3·11(ZJD3series),haploid strains e36、c36-8、e36-9 and anenploid strain C19 were used for investigating． Firstly,choose the optimum spomlation medium．Aider 7 days ofgrowth on the McClary medium tubes at 25℃．reached a maximum sporulation rate of47％．We got 71 haploid strains after sporulafion ofZJD3 series．Testing their mating types and measuring the ethanol fermentation capacity,found that among all the mating types, the number ofa type was far more than the number ofa type．4 high ethanol—production haploids wl贯-e selected．The ethanol-production capacity ofbest strain zs-5 increased by 4．5％than its diploid par