不同日龄意蜂工蜂上颚腺10HDA分泌规律研究.docVIP

不同日龄意蜂工蜂上颚腺10-HDA分泌规律研究 蜜蜂工蜂上颚腺分泌的反式-10-羟基-2-癸烯酸 (10-hydroxy-2-decenoic acid,10-HDA)是蜂王浆中最特 色的功能成分之一。一般认为，作为蜜蜂幼虫和蜂王食 物中主要成分之一的10-HDA,主要起到抑菌和营养的 作用。Boch and Shearer(1967)研究发现，工蜂(原文未标 明蜂种)头部10-HDA含量随日龄的增加而上升,含量变 化为 0?60 ug/bee。Plettner et al.(1997)曾报道，西方 蜜蜂工蜂10-HDA平均含量为95 11 g/bee。我国目前 饲养的意蜂已经是长期本地驯化的品种，并且高产王 浆的意蜂品种已在我国大部分地区推广使用多年，对 其工蜂中10-HDA的分泌规律还未见研究，本试验以浆 蜂本地驯化后代的意蜂为材料，对不同日龄的意蜂工 蜂上颚腺10-HAD分泌规律进行了研究，现报道如下。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1蜂群 意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)蜂群由福建农 林大学蜂学学院教学蜂场提供。 1.1.2主要仪器 LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津）（色谱 柱:4.6mm X 285mm不锈钢柱,填充物:不定形硅胶C18 键合相、10u m）;SHB-lll循环水式多用真空泵（北京博医 康实验系统有限公司）等。 1.1.3 试齐IJ 甲醇（色谱纯）;无水乙醇（优级纯）;对羟基苯甲酯，含 量 99.0%;10-HDA 标准品（纯度 99.6%）。 1.2方法 1.2.1意蜂工蜂人工羽化和标记 从意蜂群中提取出快出房的封盖子脾，放入 35°C，75%?80% RH的恒温培养箱中培养。羽化当日的 蜂部分作为0日龄冷冻保存备用，其余用汕漆笔标记蜜 蜂背板、以标记当天记为0日龄，标记后放回3群意蜂群。 于标记后的第5、10、15、20天从蜂群中捕捉相应日 龄的标记蜂，分别取得5,10,15,20,25,30 □龄的工蜂，每 日龄约取100只蜜蜂装袋，置冰箱冷冻保存。 1.2.2工蜂上颚腺中10-HDA的检测 （1）不同日龄工蜂上颚腺10-HDA含量的分泌规律 研究。 取各口龄工蜂头部5个一组，做5个重复。将5个 头部置于研磨器中加少量甲醇充分研磨后，移至10 mL 容量瓶中、润洗3遍研磨器,加入容量瓶中，定容并摇匀 后，置超声波浴中超声15min,然后用0.45 u m的针式滤 器过滤后待测。 10日龄工蜂10-HDA分泌规律研究。对来自3 群蜂的10日龄工蜂各30只，共90只，对逐个对每个头 部按(1)中所述方法进行制样，检测10-HDA含量。 ⑶10-HDA测定。吸取10-HDA标准溶液ImL,内 标溶液2mL、至10mL容量瓶中、再加入甲醇至刻度、摇 匀，用于高效液相色谱(HPLC)检测。色谱仪检测条件： 波长 210nm;流动相(CH30H+0.03mol/L H3PO4+H2O)%=(55+10+35)%、流动相流速 ImL/min。用 标准品的峰面积，按比例计算样品中10-HDA含量。 2结果与分析 用 HPLC 对 0、5、10、15、20、25、30 日龄意大 利蜜蜂工蜂头部10-HDA含量的测量结果如图1所示。 由图可知，随口龄增长，工蜂头部上颚腺的10-HDA含量 不断升高。尽管Boch and Shearer(1967)的文中未标明 是蜜蜂种类，但推测应为西方蜜蜂的一种。本结果的这 种日龄变化趋势与他们的结果相似。检测表明,0日龄 工蜂上颚腺的10-HDA含量最低，平均6.72±2.98 U g/bee,即每个上颚腺平均含3.36 u g 10-HDA;此后，随口 龄增长,10-HDA含量逐渐增加;至10日龄后，达到一定 高峰，增速趋缓，10、15、20日龄的含量分别为45.20435 ±6.882246 u g/bee,45.3401 ± 11.59839 u g/bee、46.05902 土7.574184 u g/bee;至 25 日龄时，含量 再次有所增加，至30日龄时已是0日龄含量的十几倍, 为所测最高值、平均为56.00± 15.8 u g/bee、范围为 33.43 u g/bee?83.4 u g/bee。 3讨论 对蜜蜂上颚腺中10-HDA含量已有不少研究，主要 集中于信息素研究角度开展。有报道日龄的A.m. intermissa工蜂上顎腺中10-HDA含量仅有 (0.14#61617;0.06) u g(Moritz et al.,2002);室内饲养 (无王状态)的0?4日龄海角蜜蜂(A. m. capensis)工蜂 上颚腺10-HDA的含量随日龄增加而增加,0日龄为 (0.77#61617;0.26) U g,4 日龄为(2