前列腺特异抗原3慢病毒表达载体构建和包装.PDFVIP

中国癌症杂志 2013年第23卷第11期 《 》 CHINA ONCOLOGY 2013 Vol.23 No.11 857 前列腺特异抗原3慢病毒表达载体的 构建与包装 1 2 1 1 刘晓军 　王娜 　姚旭东 　曹达龙 1. 复旦大学附属肿瘤医院泌尿外科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海 200032 ； 2. 复旦大学附属肿瘤医院肿瘤研究所，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海 200032 　　［摘要］　背景与目的： 前列腺癌抗原3(prostate cancer antigen 3，PCA3)作为一种长链非编码 RNA(lncRNA)已被证实在前列腺癌中高度特异性表达，暗示其可能在前列腺癌中发挥重要作用，为深入研究， 我们将完整的PCA3基因转入真核表达载体，并构建慢病毒包装系统。方法：从前列腺癌细胞株LNCaP细胞中提 取总RNA，运用重叠延伸方法扩增到PCA3基因，测序正确后定向接入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP， 酶切鉴定并测序正确后进行慢病毒包装和滴度测定。结果：经PCR鉴定及测序，PCA3表达质粒序列与Gene Bank 序列进行Blast比对分析，同源性为99.8%，PCA3慢病毒滴度测定为2×108。结论：PCA3成功插入真核表达载 体并完成了慢病毒包装，为深入研究PCA3基因在前列腺细胞中的作用奠定了基础，进而为探索前列腺癌的治疗 提供了新的途径。 　　［关键词］　前列腺癌；前列腺癌抗原3；真核表达载体；慢病毒 　　DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2013.11.001 　　中图分类号：R737.25　　文献标志码：A　　文章编号：1007-3639(2013)11-0857-06 Construction of eukaryotic expression vector and package of lentivirus vector encoding prostate cancer antigen 3 LIU Xiao-jun1 2 1 1 , WANG Na , YAO Xu-dong , CAO Da-long (1.Department of Urology, Fudan University Shanghai Cancer Center, Department of Oncology, Shanghai Medical College Fudan University, Shanghai 200032, China; 2.Department of Cancer Institute, Fudan University Shanghai Cancer Center, Department of Oncology, Shanghai Medical College Fudan University, Shanghai 200032, China) Correspondence to: YAO Xu-dong E-mail: yaoxudong67@ 　　［Abstract ］ Background and purpose: The increased of specific expression of prostate cancer antigen 3 (PCA3), as one of long non-coding RNA, has been observed in prostate cancer, indicating that PCA3 may contribute to the development