dna分子水平的罗布麻”分类、遗传多样性及种质鉴定研究-植物学专业毕业论文.docxVIP

摘要摘要 摘要 摘要 本论文选取分布于中国各地有争议的三个分类群的“罗布麻”植物样本作为实验材料， 采用改进Qiagen法从干燥和标本叶片中提取到完整的基因组DNA，运用ITS、tmL内含 子与trnL-F间隔区以及RAPD等分子标记技术探讨我国三种“罗布麻”的分类问题和亲缘关 系；利用PCR产物直接测序法和RAPD-SCAR法分别对罗布麻及其易混品进行分子鉴定； 并对罗布麻和大叶白麻野生居群分别进行RAPD遗传多样性分析。主要研究内容和结果如 下： 1．不同保存状态“罗布麻”叶片基因组DNA的提取 参照从乙醇保存的动物样本中提取基因组DNA的方法，采用Qiagen植物基因组DNA 提取试剂盒，并在核裂解之时加入木瓜蛋白水解酶37C温浴振荡水解12小时，以去除蛋 白质释放DNA，后续步骤按照Qiagen说明书的方法。按照这一方法从不同生长季节(取 材时间从2005年7月-2005年10月)与不同贮存方法(硅胶干燥、自然干燥与18年前的 常规压制标本叶片)的三种“罗布麻”叶片中均提取出完整的基因组DNA。 2．“罗布麻”的分类问题与亲缘关系研究 (1)测定了罗布麻、白麻和大叶白麻的核糖体DNA ITS序列、叶绿体trnL内含子与 trnL-F间隔区序列，并结合OenBank中相关属种植物的ITS、tmL内含子与trnL．F间隔区 (含外类群)对我国产“罗布麻’’的系统分类问题进行了分析。结果表明：罗布麻、自麻和 大叶白麻都应属于罗布麻属，而且它们之间的亲缘关系较罗布麻属内其他植物种间的亲缘 关系更近。C2)对来源于9个省份的10个罗布麻居群样本和3个省份的5个大叶自麻居群 样本进行RAPD-PCR检测，分析罗布麻和大叶白麻种间和居群间的遗传距离、相似度、多 样性指数，并进行系统聚类，结果显示，罗布麻和大叶自麻的亲缘关系超出了同一个种内 不同居群间的关系。应为罗布麻属(和口毋删聊)内亲缘关系较近的两个种。 3．罗布麻及其近缘相似种的分子鉴定研究 (1)利用PCR产物直接测序法对罗布麻及其易混品大叶白麻apoaeyn绷cam2abinum 的核基因组(rDNA)ITS区与叶绿体基因组(cpDNA)lrnL内含子及trnL-F间隔区序列进行 比对．结果显示l罗布麻和大叶白麻ITS序列完全一致，与A．cannabinum在ITSl区有 13个位点、在ITS2区有lO个位点不同；在trnL内含子区及trnL-F间隔区．罗布麻和大 叶白麻共有3个位点不同，罗布麻和五cannabira册间共有23个位点、大叶白麻和彳． 摘要cannabinum间共有20个位点不同。研究表明，依据ITS区序列可鉴别A．cannabinum和 摘要 cannabinum间共有20个位点不同。研究表明，依据ITS区序列可鉴别A．cannabinum和 国产“罗布麻”(罗布麻与大叶白麻)；利用trnL内含子及trnL-F间隔区序列可鉴别罗布麻、 大叶白麻和A．cwmabinum。(2)用80条RAPD随机引物对罗布麻和大叶白麻不同居群样 本扩增，筛选出两条罗布麻特异片段B08-407和B03．1368；片段经克隆测序，并根据所测 序列设计SCAR引物，其中B03．1368SCAR引物在退火温度59℃时，将罗布麻和大叶白麻 简便、准确鉴别开来，将此SCAR标记命名为SCB03．1368。 4．罗布麻与大叶白麻野生居群遗传多样性分析 (1)利用RAPD分子标记技术对采自我国8个省份的9个罗布麻野生居群的遗传多 样性进行检测。结果表明，罗布麻具有较高的遗传多样性水平，遗传分化主要发生在居群 间。居群间遗传距离与聚类结果显示各居群间的亲缘关系与地理分布和环境特征有一定的 相关性。根据引物B03产生的标记识别码可以有效鉴别罗布麻9个居群。(2)对分布于 新疆、甘肃和青海三地的5个大叶白麻野生居群进行RAPD遗传多样性分析，结果也发现， 大叶白麻遗传多样性水平并不低，居群间的遗传分化水平远高于居群内。聚类分析显示居 群问的相似度与分布区的地理和气候特征相关。建议在利用罗布麻和大叶白麻资源时，根 据各个居群的品质和遗传特征，对多个居群及其生境加以保护． 关键词：罗布麻；白麻：大叶白麻；分类；鉴定；ITS：trnL内含子；trnL-F间隔区；黜”D； SCAR；遗传多样性 本研究课题得到“十五国家科技攻关基金(2004BA502810)和江苏 省高新技术研究计划(BG2006318)资助l 2 The The study of taxonomy，genetic diversity and identification of‘Luobuma’on the level of DNA Abstract In order to resolve the divergence Oil th