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浙江大学生物化学实验甲 目用正交法测定几种因素对酶活力的影响
用正交法测定几种因素对酶活力的影响 1、正交法简介 在生产实践中,试制新产品、改革新工艺、寻求好的 生产条件等,都需要先做试验。而试验总要花费时间,消 耗人力、物力、因此人们总希望做实验的次数尽量少,而 得到的结果尽可能的好。要达到这个目的,就必须事先对 实验作合理的安排,也就是要进行试验设计。 实际问题是复杂的,对实验有影响的因素往往是多 方面的。我们常常需要考察各因素对实验影响的情况,但 在多因素、多水平试验中,如果对每个因素的每个水平都 互相搭配进行全面试验,需要做的试验次数就会很多。 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 比如对两个7水平的因素,如果两因素的各个水平都 互相搭配进行全面试验,要做72=49次试验,而3个7水平 的因素要进行全面试验,要做73=343次试验。作这么多次 试验,要花费大量的人力、物力,还要用相当长的时间, 显然是非常困难的。有时,由于时间过长,条件改变,还 会使试验失败。 人们在长期的实践中发现,要得到理想的结果,并 不需要进行全面试验,即使因素个数、水平都不太多,也 不必作全面试验。我们总是希望在不影响试验结果的前提 下,尽可能的减少试验次数,正交试验设计就是解决这个 问题的有效方法。 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 2、正交法的原理 正交试验设计的主要工具是正交表。正交试验设计 是通过借助于正交表,简化表格计算,正确分析结果,从 而找到试验的最佳条件,分清因素的主次,这样就可以通 过比较少的试验次数达到好的试验效果。实践证明,正交 法是一种多、快、好、省的方法,目前已被广泛应用于工 农业生产和科学试验中。 本试验运用正交法测定底物浓度、酶浓度、温度、 pH值这四个因素对酶活性的影响,并求得在什么样的底 物浓度、酶浓度、温度和pH值时酶活力最大。 3、正交法的设计过程(以本试验为例) 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 ⑴、根据试验目的,确定要考核的试验指标。 ⑵、确定要考察的试验因素和各因素水平。 要通过对实际问题的具体分析选出主要因素,略去 次要因素,这样可使因素的个数少些,从而减少试验次数 和计算。本试验取四个因素,即底物浓度[s]、酶浓度 [E]、温度、pH值。每个因素选三个水平(水平即在因素 的允许变化范围内,要进行试验的“点”)。试验因素和选 用水平如表1所示。 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 作因素、水平表时,各因素的水平最好不要按大小 顺序排列。 如按一般方法,对四个因素三个水平的各种搭配都 要考虑,共需做34=81次试验,而用正交表只需做9次试验。 ⑶、选择合适的正交表 首先根据各因素的水平选择相应水平的正交表,同 水平的正交表有好几个,究竟选哪一个要看因素的个数, 一般只要正交表中因素的个数比试验要考察的因素的个数 稍大或相等就行了。这样既能保证达到试验目的,而试验 的次数又不至于太多,省工省时。 正交表的表示:正交表 Ln(tq) 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 L:正交表的代号; n:处理数(试验次数) t:水平数; q:因素数 试验次数n=q(t-1)+1 本试验选用四因素,每个因素选三个水平,因此可 选用正交表L9(34)。 ⑷、在所选的正交表上进行表头设计 把因素放入正交表头的工作,叫做表头设计。如本 试验是一项四因素各三水平的试验,因此表头设计时,可 将四个因素依次放在L9(34)的第1,2,3,4列上。见表 2所示。 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 正交表都具有以下两个特性: a、在每一列中,各水平出现的次数相等,即在任何 一列中,数字1、数字2和数字3都出现三次(几个水平就 均出现几次) 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 b、任何两列中,横行组成的数对出现的次数相等, 均出现一次(这里有9个不同的数对,均出现一次),即 (1,1)、(1,2)、(1,3)、(2,1)、(2,2)、 (2,3)、(3,1)、(3,2)、(3,3)各出现一次。 以上这些特点保证了用正交表安排的试验计划是均 衡搭配的,因此分析数据比较方便,可进行综合比较,结 果比较可靠。 4、 酶活力的测定原理 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 5、试验安排 先将本试验的四个因素依次填入L9表的因素1,2, 3, 4中,再将各列的水平数用该列因素相应的水平写出 来,便可得到如表3所示的试验安排表。见P109。表中试 验号共9个,表示要做9次试验,每次试验的条件如每一纵 行所示。 试验的终止及酶活力的测定过程详见P109。 6、试验结果及分析 试验做好后,把9个数据填入表4试验结果栏内,按 表中数据计算出各因素的一水平试验结果总和、二水平试 验结果总和、三水平试验结果总和,再取平均
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