VisiFluor实时比率显微成像系统（钙离子、FRET）.PDFVIP

VisiFluor实时比率显微成像系统（钙离子、FRET） 胞浆钙离子浓度变化是肌肉收缩、神经传导、个体发育、免疫应答、细胞分泌与凋亡的关键调控信号，活细 胞内不同微区钙离子浓度规律性变化的成像研究一直受到关注。Visitron公司VisiFluor 实时比率显微成像系 统其基本原理是采用荧光染料如检测钙离子的Fura-2或BCECF氢离子荧光探针等，测量细胞内离子浓度， 如钙离子、pH值等，或做FRET （荧光共振能量转移）成像实验。 实验原理 一般采用单波长测量或双波长比率测量方法，其中双波长方法 是根据钙离子与荧光探针结合发生的激发光或发射光光谱偏 光 移，提供双激发或双发射模式用比率检测来实现。 学 显 常用的钙离子荧光指示剂Fura-2，可与胞内游离钙离子特异结 微 合。钙结合形式的Fura-2激发波长为340nm，游离形式 （未结 成 像 合钙离子）的Fura-2激发波长为380nm。Fura-2法可用于测定 系 组织块、器官、培养的单层贴壁细胞、血小板等多种细胞胞内 统 游离钙，此定量检测方法具有快速、灵敏等优点。 V i s 应用领域 i F l u  神经生物学：离子浓度改变引发的信号发射 o r  生理学：肌肉运动-心肌细胞中的钙信号 实 时  细胞生物学：动植物细胞信号传导、离子通道 比  发育生物学：卵受精机制 率 显  药物学：药物筛选、药效评价等方面 微 成 像 常见离子浓度测量荧光探针 系 统 +  Fura-2:双波长340/380nm激发；单波长510nmCa 测量 +  Fura-3:单波长490nm激发；单波长530nmCa 测量  Indo-1:单波长350nm激发；双波长405/480nmpH测量  BCECF:双波长440/490nm激发；单波长530nmpH测量  SNAFL-1: 双波长514/550nm激发；单波长600nmpH测量 由于不能同时激发两种激发光，需要激发光轮流切换；而钙离 子的浓度常常瞬间 （毫秒级）发生变化，若切换速度过慢，则 无法捕捉在切换波长的时间内发生的瞬间离子浓度变化。所以