鸡Ⅱ型抗菌肽LEAP2的原核表达及抑菌研究.docVIP

鸡II型抗菌肽LEAP-2的原核表达及抑 研宄 许冬梅武晋孝田文霞闫芳高文伟马海利郑明 学程志学赵宇军 山西农业大学生命科学学院山!A!B= 山西农业大学生命科学学院山 !A!B= 饲料兽药检查所 山西农业大学动物科技学院 为了研究鸡II型抗菌肽LEAP-2的体外表达产物的活性，试验进行了肝脏样品无 菌采集，基因的克隆及密码子优化和表达，以表达产物对致病菌做纸片法药敏 试验，判断其抑菌作用。结果表明，试验经低温处理获得了较好的肝脏总RNA， 克隆并优化了鸡LEAP-2基因;经诱导得到了表达产物，形式为包涵体;抑菌试验 表明，表达产物对16株分离致病菌具有抑制作用。 关键词： LEAP-2;抗菌肽;原核表达;抑菌试验; 许冬梅(1974-)，女，山西太谷人，讲师，硕士，主要从事动物遗 传及机制研宄工作。 2017-08-29 基金：山西省科技攻关项目(20140311021-3) Study on Prokaryotic Expression and Bacteriostasis Activity of Chicken Type II Antimicrobial Peptide LEAP-2 XU Dongmei WU Jinxiao TIAN Wenxia YAN Fang GAO Wenwei MA Haili ZffiNG Mingxue CHENG Zhixue ZHAO College of Life Science， Shanxi Agricultural University; Feed and Veterinary Drug Inspection Department of Shanxi Province; College of Animal Science and Veterinary， Shanxi Agricultural University; Abstract： To determine the antibiotic activity of chicken LEAP-2 expressed in vitro, the gene of LEAP-2 was applied by RT-PCR instructed by the sequence NMoOlOO16O6， and then was done with codon optimization and cloned into p GEX-6 P-1. After expressed in E. coli DE3， the expressed product was managed to do antibiotic experiment by bacteriostasis circle test. The results showed that chicken LEAP-2 gene had a satisfied gain under liquid nitrogen processing, LEAP-2 was cloned and after optimized then expressed by incusion bodies type, antimicrobial susceptibility test result showed that 16 E. coli strain owned in laboratory was sensitived to the protein. Keyword： chicken; LEAP-2; antimicrobial peptide; prokaryotic expression; bacteriostatic test; Received： 2017-08-29 鸡LEAP-2，是肝脏表达II型抗菌肽，为肝脏中产生并微量存在的一种抗菌肽 ［1-8］。在肉鸡和蛋鸡养殖中，细菌感染和继发感染的治疗是一类比较棘手的问 题。现代生活中，人们膳食结构的改变和对饮食质量的要求使得肉鸡和蛋鸡的生 产逐年增加，其幅度之大可以用指数增长来形容。而动物的大量集中和高密度饲 养使得病原菌有丫很好的滋生条件，同时药物的残留及有效的抗生素在兽医领 域的禁用，导致了养鸡生产中针对细菌感染的药物选择越来越少，鸡LEAP-2抗 菌肽的发现为解决这种困境提供了一种新的思路［9-16］。 本研宄针对从鸡肝脏中克隆并优化了密码子的LEAP-2进行了原核表达，旨在能 够提供一种可供选择的抗菌产品来缓解生产中病原菌的困扰。 1材料和方法 1.1材料 1. 1.1试验动物 5只2周龄健康红布罗鸡，购自太芥县肉鸡养殖场。4株致病性大肠杆菌来源于 山丙农业大学动物科技学院预防系兽医微生物实验室分离菌株。 1.1.2主要试剂 DEPC溶液及D