环介导等温扩增技术检测食品安全的研究进展-中国生物工程预印本.PDFVIP

环介导等温扩增技术检测食品安全的研究进展 1§ 1§ 1 1 1** 1** 王静 许鑫 王雪雨 姚伦广 阚云超 冀君 （南阳师范学院，南阳市兽医生物工程技术研究中心/南阳师范学院昆虫生物反应器河南省工程实验室，河南南阳473061） 摘要：食品安全一直是全世界公众健康的关注焦点。环介导等温扩增 （Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）技术是一种特异性强、灵敏度高、快速简便的等温核酸扩增技术，近年来 在核酸检测领域有着广泛的研究和应用。将LAMP 技术应用到食品安全检测领域，可以快速准确 的监控一些食品安全问题对人类健康所构成的危害。因此针对LAMP 技术在食品安全检测方面的 1 v 优势进行分析，并结合LAMP 技术与新兴诊断技术平台的联合运用进行了展望。 2 0 关键词：环介导等温扩增 食品安全 核酸检测 优化 联合应用 0 近年来，由食品安全问题引发的事故屡见不鲜，对人类健康和社会安全都造成了 0 0 . 很大的威胁。现在的食品安全问题主要分为两方面，一方面是食源性致病菌引发的食 7 0 品安全问题，例如人畜共患的沙门氏菌和单增李斯特菌等。另一方面为食品质量的安 8 1 全问题，例如食品掺伪问题，贩卖未标注转基因食品问题。 0 2 2000 Notomi [1] : 环介导等温扩增技术首次报道于 年，由日本学者 等创建 。它利用 v i Bst-DNA , 65 识别多区域特异性引物组和具有链置换活性的 聚合酶 在 ℃左右等温条件 X a 1h 109 [2] PCR LAMP 下 内能扩增出高达 拷贝的靶序列 。与常规 技术相比， 设备能简化 n i h 操作流程、节省检测时间，又能满足快速检测的需要，更具有推广性。特别适用于基 c 层单位及实地现场检测，有利于从源头控制食品安全事故的发生，非常适合食品检测 [3] 机构、出入境检验部门、边远基层地区进行检测 。 1. LAMP技术 1.1 LAMP反应原理 环介导等温扩增反应可分为两个阶段。第一阶段为哑铃状初始结构的形成。首先 FIP F2c Bst-DNA DNA F3 由引物 与 区互补配对，通过 聚合酶延伸合成 链。然后 引物 ———————————— 河南省高等学校重点科研项目(18A230012)  lunguangyao@163.com jijun84@ 通讯作者，电子邮箱： ； § 共同第一作者 1 与F2c 区前端的F3c 区互补配对，通过合成新的DNA 单链置换掉FIP 引物合成的DNA 单链。被置换的单链存在互补的F1c 和F1区，会自我碱基配对形成环状结构。同理， BIP 引物同该单链杂交合成互补链，在此过程中环状结构被打开。接着外引物 （F3 与