胰高血糖素样肽1对内皮祖细胞增殖分化能力的影响及其机制.PDFVIP

中南大学学报（医学版） 　２０１０，３５（１２）　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｘ．ｘｙｓｍ．ｎｅｔ １２５４ ＪＣｅｎｔＳｏｕｔｈＵｎｉｖ（ＭｅｄＳｃｉ） 胰高血糖素样肽 １对内皮祖细胞 增殖分化能力的影响及其机制 谢晓云，莫朝晖，陈科，何红晖，谢艳红 （中南大学湘雅三医院内分泌科，长沙４１００１３） ［摘要］　目的：探讨胰高血糖素样肽 １（ＧＬＰ１）对体外培养的人外周血 内皮祖细胞（ＥＰＣｓ）增殖分 化能力的影响及可能的作用机制。方法：采用密度梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞，培养 ７ｄ 后，收集贴壁细胞。贴壁细胞用不含 ＦＢＳ的 Ｍ１９９培养液培养 ２４ｈ后，分成４组：对照组和 ＧＬＰ１各浓 度组（１，１０，２０ｎｍｏｌ／ＬＧＬＰ１共 ３组），分别用含 ０．２％ＢＳＡ，１，１０，２０ｎｍｏｌ／ＬＧＬＰ１的 Ｍ１９９培养液培 养７２ｈ。倒置相差显微镜下观察 ＥＰＣｓ生长情况，ＭＴＴ法检测 ＥＰＣｓ的增殖能力；ＲＴＰＣＲ技术检测 ＥＰＣｓ 中ＫＤＲ，Ｆｌｔ１，ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎ，内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）ｍＲＮＡ的表达，ＥＬＩＳＡ法测定细胞上清液内皮 细胞生长因子（ＶＥＧＦ）浓度，ＳＰ法检测细胞 ＶＥＧＦ蛋白表达。同时用 １００ｎｇ／ｍＬＶＥＧＦｍＡｂ对１０ｎｍｏｌ／Ｌ ＧＬＰ１培养的ＥＰＣｓ进行干预。结果：与对照组比较，ＧＬＰ１各浓度组 ＥＰＣｓ增殖明显（Ｐ＜０．０５或 Ｐ＜ ０．０１），ＥＰＣｓ中ＫＤＲ，Ｆｌｔ１，ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎ，ｅＮＯＳｍＲＮＡ表达增强，细胞上清液中ＶＥＧＦ浓度显著升高、细 胞 ＶＥＧＦ蛋白表达增强（Ｐ＜０．０５或 Ｐ＜０．０１）。ＶＥＧＦｍＡｂ（１００ｎｇ／ｍＬ）下调 ＧＬＰ１培养的 ＥＰＣｓ增殖 能力，细胞 ＫＤＲ，Ｆｌｔ１，ＶＥｃａｄｈｅｒｉｎ，ｅＮＯＳｍＲＮＡ表达下降。结论：ＧＬＰ１对体外培养的人外周血 ＥＰＣｓ 的增殖和分化能力具有一定的促进作用，上调 ＶＥＧＦ自分泌是其可能的作用机制之一。 ［关键词］　 胰高血糖素样肽 １；　内皮祖细胞；　增殖；　分化；　血管内皮生长因子 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２７３４７．２０１０．１２．００９ Ｅｆｆｅｃｔｏｆｇｌｕｃａｇｏｎｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ１ｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍ ＸＩＥＸｉａｏｙｕｎ，ＭＯＺｈａｏｈｕｉ，ＣＨＥＮＫｅ，ＨＥＨｏｎｇｈｕｉ，ＸＩＥＹａｎｈｏｎｇ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，ＴｈｉｒｄＸｉａｎｇｙａＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００１３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｇｌｕｃａｇｏｎｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ１ （ＧＬＰ１）ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ（ＥＰＣｓ）ｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍ ｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｈｕｍａｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｂｙ ｄｅｎｓｉｔｙｇｒａｄｉｅｎｔｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ．Ａｆｔｅｒ７ｄａｙｓｏｆｃｕｌｔｕｒｅ，ａｔｔａｃｈｅｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆ０．２％ ＢＳＡ，ａｎｄＧＬＰ１（１，１０，ａｎｄ２０ｎｍｏｌ／Ｌ）．Ｌａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅ