小反刍兽疫病毒RT-LAMP检测方法的建立.PDFVIP

一 32一 懒嘲 中国动物检疫2010年第27卷第4期 小反刍兽疫病毒RT-LAMP检测方法的建立 李 林，吴晓东，包静月，李金明，王君玮，王志亮 (中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032) 摘 要：利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT—LAMP)建立了小反刍兽疫病毒快速检测方法，同时评价了该 方法的灵敏性和特异性。结果表明，根据小反刍兽疫病毒N基因保守区域设计的LAMP引物能够在63(2恒温下，1小 时内实现 目的核酸的大量扩增，由于在检测前加入荧光指示试剂，检测结果可以直接用 肉眼判断，避免了由于开盖 检验带来的扩增产物污染导致的假阳性。该检测体系具有较高的特异性，只能特异性地检测 目的病毒，与其他同属 的病毒或类似病毒等无交叉反应；具有较高的检测灵敏度，比普通RT-PCR灵敏性高10倍，与荧光RT—PCR的灵敏度 相 当。 关键词：小反刍兽疫病毒；逆转录环介导等温核酸扩增；检测 中图分类号：S852．659．5 文献标识码：A 文章编号：1005—944X(2010)40—0032—04 DevelopmentofaReverseTranscription Lo叩-Mediated IsothermalAmplificationAssay forRapidDerection ofPestedespetitsRuminantsVirus LiLin，Wu Xiao-dong，BaoJing—yue，LiJin—ming，W angJun-wei，W angZhi-liang ationalDiagnosticCenterforExoticAnimalDiseases，ChinaAn imalHealthandEpidemiologyCenter，Qingdao 266032，China) Abstract：A one—step，singletube，reverse-transcriptionloop—mediatedisothermalamplification (RT—LAMP)assay wasdevelopedforthedetection ofPestedespetitsruminantsviurs (PPRV)．A setofprimersweredesinged based on theN gene reference sequencesofthe PPRV．The assay wasoptimized to amplify PPRV RNA bv - cubation at63℃ ofr60min．Withoutgelelectrophoresis，theLAMP ampliconwasvisualized directlyin thereac- tion utbe by hte addition offluorescentdetection regentofr naked—eye inspection．The assay was specific ofr PPRV to detect differentPPRV isolates．and there wasno cross．reaction with other related viurses including Rinderpestviurs，Canine distemperviurs，and eta1．The detection limitoftheassay was similar to thatofre— a1．timeRT．PCR and 10fold higherthan the conventionalIT．PCR．ThisRT—LAM Ptassayhaspotentialapplica— tionsofrclinicaldiagnosisaswellassurveillance ofPPR． Keywords：Pestedespetitsurminantsviurs；Reverse．transcription loop—mediated isothermalamplification；detection 小反刍兽疫 (pestedespetis 现主要流行于非洲西部和中部，阿拉 传