基因x高表达对olk细胞的生物学影响-口腔医学专业论文.docxVIP

大连医科大学硕士学位论文目 大连医科大学硕士学位论文 目 录 一、摘要 l (一)中文摘要 1 (二)英文摘要 3 二、正文 5 (一)前言 5 (二)材料和方法 7 1．实验材料 7 1．1质粒和细胞株 7 1．2主要试剂 ．7 1．3主要仪器设备 ．8 1．4生物学软件 9 1．5常用试剂的配制 9 2．实验方法 ．．12 2．1对细胞的处理 ．．12 2．2质粒的扩增与提取 ．．13 2．3质粒的瞬时转染 ．．15 2．4 Real time PCR．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 1； ：j!．!；Western blot．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17 2．6 xCELLigence RTCA MP检测细胞增殖能力 1 9 2．7 Transwell法检测细胞的迁移能力 ．．19 万方数据 大连医科大学硕士学位论文2．8 大连医科大学硕士学位论文 2．8 G418的稳定筛选与克隆鉴定 ．19 2．9统计学分析 21 (三)结果 ．22 (四)讨论 ．25 (五)结论 ．27 (六)参考文献 ．28 三、综述 ．32 (一)综述 ．．32 (二)参考文献 ．．38 四、附录 ．42 五、致谢 ．44 万方数据 大连医科大学硕士学位论文基因x高表达对oLK细胞的生物学影响 大连医科大学硕士学位论文 基因x高表达对oLK细胞的生物学影响 硕士生姓名：肖庆春 指导教师：董岩副教授 指导小组：詹启敏院士 董岩副教授 刘雪锋副教授 杨贤东讲师 专业名称：口腔医学 摘要 口腔鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的肿瘤，它具有发病率高，复发率高，预 后差的特点，且具有较高的淋巴结转移率。保守的治疗方法在一定程度上会影响患 者的生理功能如吞咽和语言功能，甚至影响面容美观；而积极治疗则难以避免并发 症的发生。口腔鳞状细胞癌的病因有很多，其中一部分口腔鳞癌是由口腔黏膜白斑 恶变而来。口腔黏膜白斑是口腔黏膜最常见的癌前病损，而吸烟和饮酒是导致口腔 黏膜白斑的最主要原因，在临床上主要以组织病理检查来确诊口腔黏膜白斑，缺乏 其他有效的途径早期检测其是否具有恶变风险。因此，探寻有效的能够早期检测出 口腔黏膜白斑恶变的分子标记物成为降低口腔鳞状细胞癌发病率的一个重要的手 段。 目的：通过实现基因x的高表达，探索基因x对口腔黏膜白斑细胞DOK的增 殖、迁移能力等生物学功能的影响。 方法：利用Real time PCR和Western blot实验检测基因x在DOK和OSCC． BD细胞中的mRNA和蛋白的表达水平，并构建真核高表达载体经鉴定后用 LipofectamineTM 2000转染试剂瞬时转染DOK细胞，采用Real time PCR和Western blot检测其转染效率及mRNA和蛋白的表达情况；采用实时无标记细胞功能分析 仪(RTCAMP)实时检测细胞转染后的增殖情况；采用Transwell法检测细胞转染 后对迁移能力的影响。Western blot检测细胞转染高表达质粒后周期蛋白CyclinBl 万方数据 大连医科大学硕士学位论文的表达变化。使用遗传霉素G418对高表达转染DOK细胞进行稳定筛选并采用 大连医科大学硕士学位论文 的表达变化。使用遗传霉素G418对高表达转染DOK细胞进行稳定筛选并采用 Western blot法检测转染后的目的蛋白表达情况。 结果：与DOK细胞相比，基因x在OSCC．BD细胞中mRNA和蛋白水平表达 均显著提高；成功构建基因X真核高表达载体，瞬时转染DOK细胞后，Realtime PCR和Western blot实验结果表明基因X的mRNA和蛋白表达水平都提高，且基 因X表达上调后促进细胞的增殖和细胞迁移能力俨O．05)。细胞周期蛋白CyclinBl 表达水平提高。基因x稳定高表达组重组蛋白表达显著提高，空白质粒转染组未 见表达。 结论：基因x真核高表达载体瞬时转染DOK细胞，基因X的表达上调， 促进细胞的增殖和迁移，这些结果提示基因x可能与口腔鳞状细胞癌的发生相 关，为进一步阐明基因x在口腔鳞状细胞癌的发生中的作用及相关机制奠定基 础。基因X高表达后引起CyclinBl表达上调，提示基因x可能与细胞周期调节 有关。而且我们利用此载体成功构建了DOK细胞的Gene X稳定高表达细胞系。 关键词：基因x细胞增殖迁移口腔鳞状细胞癌 万方数据 大连医科大学硕士学位论文Biological 大连医科大学硕士学位论文 Biological Effects