抗生素备课第十章发酵液的预处理和原液-固分离.pptVIP

1、下游加工过程 2、抗生素提炼过程包括三个方面： 1）发酵液的预处理和过滤 2）提取过程 3）精制过程 3、在整个提炼过程中应遵照下列四条原则： 1）操作时间尽量缩短 2）提炼温度一般要低 3）要选择对抗生素稳定的pH范围 4）勤清洗消毒（包括厂房设备及管路，特别要注意死角）。 第十章 发酵液的预处理和液-固分离 在发酵法生产中,发酵液中存在大量菌丝体、菌种代谢物、剩余培养基以及抗生素主组分以外的其他复杂组分。所以,在抗生素提取精制之前,必须进行预处理、过滤,以除去这些干扰物质。 第一节 确定预处理方法的基本条件 一、了解抗生素存在的部位 抗生素存在部位：发酵液或菌体内 1、发酵液：大部分抗生素分泌到胞外，经过液-固分离，得澄清发酵液，进一步纯化，得到纯品。 2、菌体内：一些抗生素如多烯类的制霉菌素、两性霉素、曲古霉素累积于菌丝体中，且水溶性很小，取其滤饼，再用其他溶剂萃取。 二、稳定性 发酵液预处理的pH、温度及化学试剂的选择，取决于抗生素的稳定性。 如青霉素稳定性差，酸化pH只能控在4.8~5.2,并要求低温。（青霉素是很不稳定的化合物，遇酸、碱或加热都易分解而失活，特别是β-内酰胺环，失去抗生能力。） 多黏菌素E稳定性好，可在pH2. 0, 95℃进行处理。 红霉素酸性不稳定,而在碱性中较稳定,故发酵液只能加NaOH调pH7.9~8.0,过滤去除蛋白质。（红霉素经酸水解产生脱水红霉素，脱水红霉素进一步水解成红霉糖胺和红霉糖。） 三、提取工艺对滤液质量的要求 一般要求：滤液澄清、pH适中、有一定浓度。 不同的提取工艺路线，对滤液质量要求不同。 如离子交换法：对无机离子（特别是高价离子）、灰分含量、澄清度要求较严。 溶媒萃取法：要求蛋白含量低，减轻乳化现象。 直接沉淀法：对滤液质量要求更高，加草酸酸化，还要加净化剂，滤液还需复滤，结晶前还需脱色处理。 第二节 发酵液预处理的方法 发酵液预处理的目的： 1、去除可溶性黏胶状物质，包括核酸、杂蛋白、不溶性多糖等。 2、去除无机盐，包括Fe3+、Ca2+、Mg2+等，他们的存在会影响成品质量，影响离子交换提取过程。 为达到预处理目的，经常将发酵液pH调节至酸性或碱性。如四环类抗生素由于能和钙、镁、钡等离子形成不溶性的络合物，故大部分沉积在菌丝内，用草酸酸化后，就能产生草酸钙沉淀，使四环类抗生素从菌丝体中转入水 相中。 酸化剂可采用盐酸、硫酸、磷酸、草酸等。但在选择酸化剂时应考虑适合抗生素产品性能，对设备腐蚀性以及价格低廉、来源方便等。常用的是草酸，因为草酸酸性温和、腐蚀性小，并能与发酵液中碱土金属结合成沉淀而析出，起释放抗生素作用。 碱化剂常用：氢氧化钠、碳酸钠、氨水等，最常用氢氧化钠，因为来源便宜，价格便宜，不污染环境等，但腐蚀性大。碱化时可时铁离子生成氢氧化铁以及部分蛋白沉淀除去。 一、菌丝体及蛋白质的处理 1、等电点沉淀 蛋白质为两性物质，在等电点时，在水中溶解度最小，能沉淀除去。蛋白质等电点都在酸性范围内，pH4.0~5.5。 2、变性沉淀 最常用的方法是加热，适合于对热稳定的抗生素，加热可加速蛋白凝聚，还能使液体黏度降低，加快过滤速度。如，在链霉素生产中，采取pH3.0~3.5情况下，加热70~75℃，维持30min以凝固蛋白质，过滤速度可提高3倍，黏度降低到原来的1/6。 3、加各种沉淀剂沉淀 蛋白质能与一些阴离子如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等形成沉淀。在碱性溶液中，能与一些阳离子如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+和Pb2+等形成沉淀。 4、加入凝聚剂 某些无机盐可使细胞、细胞碎片及蛋白质等胶体颗粒发生凝聚作用而被去除。常用的凝聚剂：Al2（SO4）3· 18H2O、AlCl3 · 6H2O、FeCl3、ZnSO4、MgCO3等。 5、加入絮凝剂 如壳聚糖、海藻酸钠、明胶等。发酵液中加入絮凝剂，形成粗大的絮凝团，有助过滤。 6、吸附 利用吸附作用能有效去除杂蛋白。 例如四环素发酵液中加入黄血盐和硫酸锌，生成亚铁氰化锌钾K2Zn3[Fe（CN）6]2的胶状沉淀，将蛋白与菌体去除。 7、酶解法去除不溶性多糖 如淀粉酶将培养基中多余的淀粉水解成单糖，降低发酵液黏度，提高滤速。 二、高价金属离子的去除 主要是Ca2+、Mg2+、Fe3+等高价金属离子。 （1）Ca2+ ： 加入草酸，反应生成草酸钙还可使蛋白质凝固，提高滤液质量，但草酸价格较贵，应注意回收。 （2）Mg2+ ： 加入三聚磷酸钠Na5P3O10 ，与Mg2+形成络合物，消除Mg2+的影响。 用磷酸盐也能大大降低Ca2+、 Mg2+浓度。 （3）Fe3+ ： 加入黄血盐，形成普鲁士蓝沉淀 第三节 发酵液的液-固分离 一、设备 1、板框压滤机 这是目前较常用的过滤设备。优点