第六章细胞工程技术.ppt

第六章。细胞工程技术 *细胞工程（Cell Engineering):指应用细胞生物学和分子生物学技术，人为改变细胞的结构和性状，使之满足某种研究和应用的需要。（P199) *范例：基因诱变→筛选，扩增突变细胞系。 细胞杂交→筛选，扩增杂种细胞株。 转基因技术→转基因生殖细胞→转因生物。 克隆动物技术→细胞拆合，核-质杂交→杂交体发育 →克隆动物。 干细胞培育人工器官→分离干细胞→体外培养诱导目 的组织器官生成→回植体内。 基因敲除技术→从细胞中敲除目的基因→检测效应。 一。建立突变细胞系 1.Mutant Cell Line：指人为培养获得的突变性质一致，性状均一，可离体培养增殖 ，遗传的细胞群。 2.突变细胞系的来源： *自然突变：机率低，方向不定。可从突变 个体分离培养突变体细胞，扩增建系。 *人工诱变：可定向诱变，突变率较高。筛 选突变细胞扩增培养。如： HGPRT+ 甲基硝基亚硝基胍 HGPRT— （次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷） TK+ BrdU TK— (胸苷激酶缺陷） 定向诱变剂的发现具有重要意义。 3.突变细胞的筛选与克隆扩增------人工选择培养基技术 *HAT培养基可筛选保留HGPRT+和TK+细胞 （H:次黄嘌呤，A:氨基喋呤，T:胸腺嘧啶） *含MP(6-巯基嘌呤）和AG(6-杂氮鸟嘌呤）的培养基可筛选保留HGPRT--细胞。 （原理见P191鄂著） 二。细胞融合技术 1.细胞杂交（Somatic Cell Hybridization): 指两个或两个以上的细胞融合成一个杂种细胞(hybrid cell)的过程。P199 2.原理：p203图6-3 同或异种C促融剂 异核体C分裂 同核体筛选 聚乙二醇 （c质融合） （C核融合） →杂种细胞克隆扩增。 3.杂种细胞的筛选： c甲 甲C BrdU ( HGPRT+ /TK- ) c甲同核体 [ 诱变] x → c甲乙同核体 乙CMNNG (HGPRT- /TK+ ) c乙同核体 c乙 HAT培养基筛选→ c甲乙同核体 （杂种细胞基因互补） 三。杂交瘤单克隆抗体制备技术 1.概念：该技术综合运用了多项细胞生物学方法，可针对各种有抗原活性的物质制备所需要的特异抗体，是细胞工程学的一项杰出成就。一旦一种杂交瘤单克隆抗体细胞系建成，即可长期保存，大量扩增，用于生产目的抗体。 2.原理：用目的抗原致敏的脾细胞（B淋巴细胞）能分泌特异抗体，但不能在体外长期培养增殖。骨髓瘤细胞可在体外大量长期增殖，但不能分泌抗体。将骨髓瘤细胞与脾细胞融合，所获杂交细胞既可体外大量长期增殖，又可分泌抗体。克隆扩增的杂交细胞系是能分泌针对单一抗原决定簇的单克隆抗体。P207 3.单克隆抗体制备技术路线：P208图6-8 目的抗原A 免疫 诱变处理 [致敏小鼠脾C] x [ 突变骨髓瘤C] (可分泌抗A抗体 （不能分泌抗体 体外增殖力差 体外增殖旺，可传代 HGPRT+ ,TK+ ） HGPRT- 或TK- ) 细胞融合所获混合C群 小鼠脾C 骨髓瘤C 杂交瘤C 同核杂种C HGPRT+ HGPRT- HGPRT+ TK+ 或TK- TK+ 无力传代 H