第七章微生物的目遗传和变异.ppt

F’菌株 当Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离其染色体组时，可形成游离的携带一小段染色体基因的F因子，特称F’因子。 携带有F’因子的菌株，其性状介于F+与Hfr之间，这就是初生F’菌株。初生F’菌株与F-菌株接合，可使后者转变成F’菌株，这就是次生F’菌株，它既获得了F因子，又获得了来自初生F’菌株的若干遗传性状。以这种接合来传递供体菌基因的方式，称为F因子转导(F-duction)、性导(sexduction) 。 在次生的F’群体中，大约有10%的F’因子重新整合到染色体组上，而恢复成Hfr菌。 四、 原生质体融合 将遗传性状不同的两种菌的（包括种间、种内、及属间）原生质体融合成为一个新的重组子的技术。 原生质体融合步骤： 1、原生质体制备 2、原生质体融合和再生 3、融合子的选择 第三节 真核微生物的基因重组 一、有性杂交 二、准性杂交 2、异核体形成 1、菌丝联合 3、核配 4、体细胞交换和单倍体化 有性杂交 杂交是在细胞水平上发生的一种遗传重组方式。 有性杂交：指性细胞间的接合和随之发生的染色体重组，并产生新遗传型后代的一种方式。 粗糙脉孢菌的有性杂交 第四节 重组DNA技术 基因工程：在基因水平上，改造遗传物质，即将分离到的或合成的基因经过改造，插入载体中，导入宿主细胞内，使其扩增和表达，从而获得大量基因产物，或者令生物表现出新的性状。 克隆载体（cloning vector）：负责将外源DNA片段运送到细胞中进行复制与扩增。 限制性核酸内切酶（restriction endonuclease ）：是指能识别双链DNA分子的特定序列，并在识别位点或其附近切割DNA的一类核酸内切酶。 一、基因工程 微生物在基因工程中的作用： 1.微生物作为克隆载体:质粒、病毒、噬菌体 2.微生物生产基因工程工具酶； 1)、限制性核酸内切酶 2)、DNA连接酶 3.微生物作为克隆载体的宿主 ； 1)、原核生物宿主：大肠杆菌，枯草芽孢杆菌 2)、真核生物宿主：酿酒酵母 4.微生物作为基因产物的重要表达载体。 5.理论基础（主要来自对微生物的研究）； 6.微生物的多样性提供了丰富而独特的基因资源。 获得目的基因 选择基因载体 体外重组 外源基因导入（细菌、植物、动物、基因枪） 筛选和鉴定 应用 基因工程的基本操作 结核分枝杆菌H37RV基因组 pncA PCR扩增 Nde I和Xho I双酶切 T4 DNA连接酶连接 基因克隆：指利用DNA体外重组技术，将一个特定的基因或者DNA序列插入到一个载体DNA分子上，然后引入适当的寄主进行扩增。 Amp Amp pncA Xho I Nde I Ori Ori MCS 载体 大肠杆菌 感受态细胞 Amp CaCl2 或者甘油 钙转化或者电转化 转化子 含氨苄青霉素的LB培养基 克隆子 * 第七章 微生物遗传和变异 通过本章的学习，要求掌握： 1、细菌基因重组的原理和方法。 2、真菌基因重组的原理和方法。 3、微生物诱变育种的原理和方法。 4、基因工程的基本原理 5、基因表达的调控 重点： 细菌的基因重组 微生物是遗传学研究中的明星 微生物细胞结构简单，营养体一般为单倍体， 方便建立纯系。 很多常见微生物都易于人工培养，快速、大 量生长繁殖。 物种和代谢类型多样 对环境因素的作用敏感，易于获得各类突变株， 操作性强。 遗传性：生物的亲代传递给其子代一套遗传信息的特性； 遗传型：生物体所携带的全部基因总称； 表型：具有一定遗传型的个体，在特定的外界环境中，通过生长和发育所表现出来的种种形态和生理特征的总和； 变异：指生物体在某种内因或外因的作用下所引起的遗传物质结构或数量的改变； 饰变：同种遗传型的生物，在不同的外界条件下，会呈现不同的表型。 第一节 生物遗传信息的载体 ①1928年，F. Griffith；1944年O. T. Avery 肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）转化试验。 ②1952年，A. D. Hershy、M. Chase的噬菌体感染实验。 ③1956年，H. Fraenkel-Conrat的TMV拆开和重建实验。 一、 证明核酸是遗传物质的经典实验 1、经典转化实验——1928年，F.Griffth 肺炎链球菌：S型（菌体具荚膜，菌落表面光滑，有致病能力） R型（菌体无荚膜，菌落表面粗糙，无致病能力） ①加S菌DNA ②加S菌DNA及DNA酶以外的酶 ③加S菌的DNA和DNA酶 ④加S菌的RNA ⑤加S菌的蛋白质 ⑥加S菌的荚膜多糖 活R