匹罗卡品致痫大鼠模型痫性发作潜伏期后齿状回γ-氨基丁酸能中间神经元活动状态的研究-生理学专业论文.pdf.docxVIP

CONTENTSChinese CONTENTS Chinese abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 English abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8 Introduction 1 6 Symbolic description 19 Materials and methods ：!() Results 28 Discussion ．． ． ．． ． 31 Figures 36 Review 52 References 56 Acknowledgement 70 A List of publications 71 Comment of debate of thesis 72 English paper I 73 English paper II．．． ． ． ．． ．．． ．．109 万方数据 山东大学博士学位论文匹罗卡品致痫大鼠模型痫性发作潜伏期后齿状回Y一氨基丁酸能 山东大学博士学位论文 匹罗卡品致痫大鼠模型痫性发作潜伏期后齿状回Y一氨基丁酸能 中间神经元活动状态的研究 博士研究生：王晓晨 导 师：詹仁知 专 业：生理学 中文摘要 【背景】 颞叶癫痫是成人患者中最为常见的癫痫类型，占局灶性癫痫的65％左右，近 1／3的颞叶癫痫患者不能以现有治疗方法进行有效的控制。除典型的反复出现的 自发痫性发作外，颞叶癫痫患者通常还伴有认知障碍、情绪状态以及社会适应行 为异常等表现。颞叶癫痫通常伴有显著的海马结构组织病理学改变，表现为以 CAl锥体细胞层细胞为代表的神经元丢失、神经胶质细胞增生、以苔藓纤维出 芽(mossy fiber sprouting)为特征的突触重建、颗粒细胞离散化(dispersion)及 齿状回的神经新生增强等。因此，海马结构尤其是齿状回被认为在颞叶癫痫的形 成中起关键作用。 有关颞叶癫痫患者痫性发作形成的机制尚未完全阐明。在用于解释癫痫形成 的主要假说中，Y一氨基丁酸(gamma—aminobutyric acid，GABA)能神经抑制减弱 这一假说最为著名。这一假说认为GABA能中间神经元介导的神经抑制减弱不 仅促进痫性发作的形成，而且有利于癫痫波的播散，具有坚实的实验基础。齿状 回中，除兴奋性细胞外，还存在GABA能抑制性神经元分布。GABA能中间神 经元不仅能够通过反馈和前馈机制维持齿状回神经网络的稳定，而且在认知功能 上也起重要作用。与同一部位的兴奋性细胞在形态、电生理学性质以及功能上具 有相对均一不同，GABA能中间神经元具有显著多样性。不管是在临床癫痫患者 术后标本还是在癫痫模型动物都观察到齿状回GABA能中间神经元数目减少、 形态和／或功能改变，只是出现改变的GABA能中间神经元亚型及其减少的程度 万方数据 山东大学博士学位论文有差异。与GABA能中间神经元数量改变相符，电生理学研究也发现有自发痫 山东大学博士学位论文 有差异。与GABA能中间神经元数量改变相符，电生理学研究也发现有自发痫 性发作的动物出现齿状回GABA能抑制的减弱。上述发现支持齿状回GABA能 抑制减弱参与癫痫的形成。另外，除了GABA能中间神经元活动减弱导致癫痫 形成的传统假说，已有实验证据显示GABA能中间神经元的激活还可能导致痫 性发作的出现。 那些在受到刺激后不需要任何新蛋白合成而出现表达上调基因被称为立早 基因(immediate early genes，IEGs)。立早基因不管是在信使RNA水平还是在 相关蛋白水平都可用来指示神经元活动及其强度。研究报道显示立早基因c—fos 和活动调节细胞骨架相关蛋白(activity-regulated cytoskeleton associated protein， Arc or Ar93．1)在电休克刺激或者化学致痫药物诱发的痫性发作中出现活动性表 达上调。但对IEGs表达能否用于研究痫性发作后GABA能中间神经元的激活尚 未有结果。 本课题使用大鼠匹罗卡品癫痫模型，在确认立早基因Arc和c．fos表达上调 可用于反应GABA能中间神经元激活的基础上，通过脑片膜片钳记录和检测立 早基因Arc和c．fos，研究了癫痫进展过程中齿状回GABA能神经元活动状态的改 变。 【主要方法】 癫痫持续状态(status epilepticus，SE)的诱导 通过腹膜腔内注射匹罗卡品诱导SE。将体重160．180 g(鼠龄6．7周)的 健康雄性Sprague—Dawley(