血清酶类【血液科】.ppt

四、工具酶 工具酶：酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性浓度的酶。 指示酶和辅助酶作为反应系统中的试剂。 （一）工具酶 （二）常用工具酶 常用工具酶多为氧化还原酶类 工具酶纯度不必要求过高 工具酶中杂质的含量有一定的限制 * （三）工具酶参与的指示反应 临床生化检验中，很多项目的测定往往使用有工具酶参与的类似的反应原理－－共通（通用）反应途径。 1. 偶联H2O2的工具酶及其指示反应 葡萄糖 尿酸 胆固醇 甘油 丙酮酸 葡萄糖氧化酶 尿酸氧化酶 胆固醇氧化酶 甘油氧化酶 丙酮酸氧化酶 H2O2 以H（e）为受体的指示酶 以NAD(P)H为辅酶参与的指示酶 触酶 POD (最常用） 2H2O2+4-AAP+酚 醌亚胺(红色)+4H2O POD * 例：葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 Glu＋O2＋H2O GA＋H2O2 H2O2＋4-AAP＋酚 H2O＋O2＋红色醌类化合物 GOD POD 葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）利用O2和H2O将Glu氧化成GA，并释放H2O2 ，过氧化物酶（peroxidase，POD）在色原性氧受体存在时将H2O2分解为H2O和O2 ，并将色原性氧受体4-AAP和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的量与Glu含量成正比。 即POD催化下， H2O2氧化芳香族胺色素原生成有色色素，此类色素原供氢体包括：OT、DAB、ODA、TMB。 * 2. NAD(P)+或NAD(P)H偶联的脱氢酶及其指示反应 许多氧化还原反应，尤其是作为工具酶如LD、GLD、G6PD等参与时，常将底物的H去除后传递给NAD (P)+形成NAD(P)H。借助NAD(P)H340nm处特征性的光吸收，借此用分光光度法检测。 如：葡萄糖、尿素、β-羟丁酸、甘油三酯、甲醇、血氨、 ALT、AST、LD、GLD、CK、ALD、G6PD、ICD等。 例： 尿素＋H2O 2NH3＋CO2 NH3＋ α-酮戊二酸 ＋NADH＋H+ 谷氨酸＋NAD+＋H2O 尿素酶 GLD P+NAD(P)H+H+ PH2+NAD(P) + * 五、血清酶活性浓度测定条件的优化 方法 仪器设备 试剂 自动生物化学分析仪参数设置 标本的采集、运输与保存 * 标本的采集、运输与保存 溶血：细胞内酶而言，细胞内外浓度差异大；所以应及时进行分离，静脉采血后应在1～2h内分离血清。 抗凝剂：利用草酸盐、枸橼酸盐、EDTA抗凝的血浆一般不用作酶活性测定；肝素对ALT、AST、CK、LD、ACP检测均无影响，可用于急诊；临床多用血清为首选测定标本。 温度：大部分酶在低温中比较稳定，一般在血清分离当天测定，否则应放冰箱冷藏；通常在0～4 °C下使用、处理及保存，除了一些冷变性的酶；液氮可作为酶学测定时血清标本及质控长期保存的方法。 * 六、酶活性浓度单位 （一）酶活性单位 惯用单位 用首先报告该种酶测定方法的临床酶学家的名字来命名其单位，即使同一种酶因方法不同而有数种活性单位，参考值差别很大。 国际单位 1963年，1IU＝1μmol/min （25 °C 及其他最适条件下） 1976年， 1U＝1μmol/min（特定条件下） 1979年，1Katal＝1mol/s（规定条件下），1U＝16.67nKatal * （二）酶活性浓度单位 以每单位体积所含的酶活性单位数表示； 各国学者习惯用U/L表示体液中酶催化活性浓度， 1U/L=16.67nKatal/L 正常上限（upper limits of normal，ULN）倍数 把酶测定值转换为正常上限值的倍数； 易于比较解释来自不同方法的结果，利于各实验室间质评调查； 可将ULN进一步适当分级，制定出轻度、中度及重度增加的范围，使检测结果更加一目了然； * （三）酶活性浓度计算 连续监测法检测酶活性浓度时，使用摩尔消光系数（ε）。其定义为：特定条件下，一定波长的光，光径为1.0cm时，通过所含吸光物质的浓度为1.00mol/L时的吸光度。 连续监测法测定在线性范围内每分钟吸光度的变化（ΔA/min） U/L＝ ΔA min × V×106 ε ×v× L ΔA—吸光度变化