2018_2019学年高中生物克隆技术第6课时动物的克隆(Ⅱ)学案浙科版.docxVIP

第6课时　动物的克隆(Ⅱ) 知识内容 要求 考情解读 动物的克隆 a 1.简述动物的细胞融合技术及应用。 2.描述动物细胞全能性的表现程度，说出动物难以克隆的原因。 3.简述动物细胞核移植的概念和程序。 4.列举动物细胞培养与动物细胞核移植的应用和发展前景。 一、动物的细胞融合技术及其应用 1．细胞融合与细胞杂交 (1)细胞融合 ①含义：指两个或多个细胞融合成一个细胞的现象。 ②促融方法：灭活的仙台病毒、聚乙二醇介导、电融合技术等，其中电融合技术是效率很高的新型细胞融合技术。 (2)细胞杂交 ①概念：基因型不同的细胞间的融合。 ②应用：细胞杂交中染色体容易丢失，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物(蛋白质)减少的对应关系可进行基因定位。 2．单克隆抗体的制备 (1)过程 (2)杂交瘤细胞的特点：无限增殖，产生单克隆抗体。 (3)单克隆抗体的优点：其识别抗原部位的专一性，比一般抗血清优越得多，原因是一般抗血清中的抗体是一群识别不同抗原部位的抗体混合物。 (4)单克隆抗体的应用：单抗可作为特异探针，研究相应抗原蛋白的结构、细胞学分布及其功能。 助学巧记　血清抗体与单克隆抗体比较 项目 分泌细胞 特点 生产 单克隆抗体 杂交瘤细胞 特异性强、灵敏度高 产量高，易纯化分离 血清抗体 各B淋巴细胞 特异性差、灵敏度低 产量低，分离困难 探究1——理性思维 下列是A细胞与B细胞融合杂交的过程图解。思考回答相关问题： 概念 指两个或多个动物细胞融合成一个细胞的现象，其中基因型不同的细胞间的融合就是细胞杂交 原理 细胞膜的流动性 诱导融合的方法 ①物理、化学方法：聚乙二醇、电刺激等；②生物方法：灭活的病毒 过程描述 膜融合→质融合→核融合 融合成功的标志 杂交细胞进行有丝分裂 重组细胞的特点 杂交细胞具有两个细胞的遗传信息，能表现两个亲本的性状 应用 检测特定染色体丢失与特定基因产物(蛋白质)减少的对应关系进行基因的定位；制备单克隆抗体 探究2——图示解读 下列是制备单抗的基本方法步骤。请完善下图并思考回答相关问题： 1．制备单克隆抗体的关键思路是：(1)克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群；(2)将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细胞。 2．用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因是什么？ 答案　(1)每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体；不同种类的B淋巴细胞分泌的抗体不同；(2)B淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖，骨髓瘤细胞能够无限增殖。 3．杂交瘤技术制备单克隆抗体的最大优点：可以从特异抗原成分比例极少的抗原混合物中获得单抗。 4．制备单克隆抗体过程中的几种细胞的特点：(1)免疫的B淋巴细胞：能产生单一抗体，但不能无限增殖。(2)骨髓瘤细胞：能无限增殖，但不能产生抗体。(3)杂交瘤细胞：既能产生特定的抗体，又能在培养条件下进行无限增殖。 5．单克隆抗体制备过程中有两次筛选，其目的分别是什么？ 答案　第一次筛选是在B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合之后，筛选出只有B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞。第二次筛选需先在多孔培养皿上培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。 6．获取单克隆抗体的场所：若在培养基中进行杂交瘤细胞培养，则从培养液中提取；若在小鼠或其他动物腹腔中培养，则从腹水中提取。 例1　(2017·浙江选考联考)TOP2A蛋白在多种肿瘤细胞中大量表达，成为抗肿瘤的研究靶点，某科研单位制作了TOP2A蛋白的单克隆抗体。请回答： (1)利用基因工程制备TOP2A蛋白：TOP2A蛋白基因和质粒用_________________________处理并连接成重组质粒，然后导入经________处理的大肠杆菌，并将大肠杆菌接种到含氨苄青霉素的LB液体培养基中培养，经离心得到菌体，破碎提纯得到TOP2A蛋白。 (2)TOP2A蛋白单克隆抗体的制备：将TOP2A蛋白反复多次注射到小鼠体内，使其发生__________，取经过免疫的小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞在__________(填物质名称)介导下发生细胞融合，形成杂交瘤细胞。并将各杂交瘤细胞单独分装培养，经筛选、________后，获得能产生单一抗体的________(A.连续细胞系　B．有限细胞系 C．连续细胞株　D．有限细胞株)。 答案　(1)限制性核酸内切酶和DNA连接酶　CaCl2　(2)免疫反应　聚乙二醇　克隆培养　C 解析　(1)在基因工程中常用限制性核酸内切酶和DNA连接酶处理并连接目的基因和质粒。为提高重组质粒导入大肠杆菌的概率，常用CaCl2处理大肠杆菌，以增大大肠杆菌细胞壁的通透性。(2)在杂交瘤细胞制备过程中，常用聚乙二醇作介导物质，选择发生免疫的B细胞和可无限传代的骨髓瘤细胞融合，筛选后获得能产生某一特定抗体的杂交瘤细胞