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实验4 透析技术 2014-2015学年第一学期研究生现代生物学实验技术 陈 飞 （chenfei@njnu.edu.cn, 2014-10-27 4.1 膜分离技术 4.1.1 膜分离的概念：利用膜的选择性，以膜的两侧存在一定量的能量差作为驱动力，由于溶液中各组分透过膜的迁移速率不同而实现分离的一种技术。膜分离属于速率控制的传质过程，具设备简单、条件温和、无相变、处理效率高、节能等优点，非常适合热敏性的生物大分子的分离纯化，同时还兼有浓缩的功能。 膜 料液 水 小分子 大分子 渗透液 浓缩液 进料液 渗透液 4.1.2 膜分离过程的分类：膜分离过程的实质是物质透过或被截留于膜的过程，近似于筛分过程，依据滤膜孔径大小而达到物质分离的目的，故而可以按分离粒子的大小分为以下几类：微滤、超滤、反渗透、透析等。 液体中可能存在的主要成分 组分 分子量/Da 尺寸/nm 组分 分子量/Da 尺寸/nm 酵母 103～104 酶 104～106 2～10 细菌 300～104 抗体 300～103 0.6～1.2 胶体 100～103 单糖 200～400 0.8～1.0 病毒 30～300 有机酸 100～500 0.4～0.8 蛋白质 104～106 2～10 无机离子 10～100 0.2～0.4 多糖 104～106 2～10 （1）微滤（Microfiltration, MF）：以多孔细小薄膜为过滤介质，压力为推动力，使不溶性物质得以分离的操作。 微滤膜：孔径分布范围在0.025~14 μm之间，截留直径为0.02~10 μm大小的粒子。 特点：是一种静态过滤，随过滤时间延长，膜面上截流沉积不溶物，引起水流阻力增大，透水速率下降，直至微孔全被堵塞。可应用于消毒、澄清、细胞收集等。如培养基液菌体分离与浓缩，产品消毒等。 （2）超滤（Ultrafiltration, UF）：分离介质同微滤膜，但孔径更小，为0.001~0.02 μm，分离推动力仍为压力差，截断分子量可变化。 特点：一种动态过程，由泵提供推动力，在膜表面产生两个分力：一个是垂直于膜面的法向分力，使水分子透过膜面，另一个是于膜面平行的切向力，把膜面截流物冲掉。适合于酶、蛋白质等生物大分子物质的分离、浓缩，超滤亲和纯化，血浆分离，脱盐，去热原，在生物工程中应用很广。 常规过滤(A)和超滤(B)的示意图 A B （3）反渗透（Reverse osmosis, RO）： 渗透：膜（不能透过溶质）两侧压力相等时，在浓度差作用下，溶剂从溶质浓度低的一侧向溶质浓度高的一侧透过的现象。渗透压：渗透现象中，促使水分子透过的推动力。 反渗透：在溶质浓度高的一侧施加超过渗透压的压力，使溶剂透过膜的操作。是一种以压力差为推动力，从溶液中分离出溶剂的膜分离操作，孔径范围在0.1~1 nm之间。 特点：基本原理为溶解扩散，在高于溶液渗透压的压力作用下，只有溶液中的水透过膜，而所有溶液中的大分子、小分子有机物及无机物全被截留住。主要用于海水脱盐，纯水制造以及小分子产品如乙醇、糖及氨基酸浓缩等。 4.2 透析原理 透析（Dialysis, DS）原理：透析只需要使用专用的半透膜便可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或者缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不停扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度到达平衡为止。 水分子 大分子 小分子 透析膜 保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或者“透析液”。透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度、正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度、正比于膜的面积和温度，通常是4℃透析，升高温度可加快透析速度。 透析膜孔径5-10 nm，实验室常用透析袋，不适于大规模生物分离过程，但在生化实验室和医学上应用很广： （1）蛋白质的脱盐、去除变性剂、还原剂之类的小分子杂质； （2）也用于置换样品缓冲液； （3）在临床上常用于肾衰竭患者的血液透析。 表征透析膜性能的几个参数： 孔的性质(包括孔径、孔分布和孔隙度)、水通量、截留率、截断分子量、透析比、抗压能力、pH适用范围、对热和溶剂的稳定性。 截留率:膜对溶质的截留能力,以截留率R（rejection）来表示，其定义为： R＝1－ Cp／Cb Cp和Cb：表示在某一瞬间，透析液和保留液的浓度。 如R＝1，则Cp＝0，表示溶质全部被截留； 如R＝0，则Cp＝ Cb，表示溶质能自由透过膜。 质量好的膜，陡直,可使不同分子量的溶质分离完全；反之，会导致分离不完全。 截断