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Brainbow脑虹技术简介 资料搜集整理：组胚周二班 生科一班 陈彦雯这样绚丽的图像是小鼠的神经细胞交织而成的网络，这些细胞来自这只小鼠大脑的海马体。平时大家所见到的大脑标本都是灰白暗淡的颜色，但是这种名叫“Brainbow”的技术则能够将神经细胞一个个区分开来，使得它们个个分明，显得格外惊艳。 到底这么绚丽的图像是怎么形成的呢，首先应该从绿色荧光蛋白谈起。 绿色荧光蛋白来自一种学名为Aequorea victoria的发光水母，绿色荧光蛋白是来自海洋的馈赠。在上世纪60年代，日本科学家下村修和美国科学家Frank H. Johnson首先揭开了水母发光的秘密。首先，他们从这些水母中提取到了水母发光蛋白，aequorin，这种蛋白质在钙离子的作用下，会发出蓝光。然而实际上，在水母身上，人们最终观察到的却是绿色的荧光。在这个过程中，将蓝光转化为绿光的，就是水母体内的另外一种蛋白质，这种蛋白质就是绿色荧光蛋白。绿色荧光蛋白的发现与改造使得这几位科学家获得了2008年的诺贝尔化学奖。 在发现之初，生物学家们就意识到了这种发光蛋白的价值，如果能在其他的细胞、组织中引入这样的蛋白质，那么在显微镜下，我们所看到的画面也就能变得更加清晰、多彩。 上世纪80年代，普鲁切（Douglas Prasher）成功地克隆出了水母中编码绿色荧光蛋白的基因，这使得荧光蛋白标记的大量应用成为了可能。有了这段基因，科研工作者能够以让特定的细胞表达这些荧光蛋白，或者把绿色荧光蛋白和各种分子结合在一起，为细胞中特定的结构染上颜色。 不过，天然的绿色荧光蛋白还不够完美，它只有一种颜色，也无法进行复杂的标记。解决这一问题的，是华裔科学家钱永健。通过对绿色荧光蛋白分子的种种改造，他得到了现在实验中广泛使用的增强型绿色荧光蛋白，以及蓝色、青色和黄色等新型荧光蛋白。在此之后，其他的实验室又从珊瑚虫中发现了红色的荧光蛋白。随着不断的探索和改造，生物学家“荧光调色盘”中的色彩也逐渐丰富了起来。这上面就是科学家发现的各种颜色的荧光蛋白。 这幅图是科学家在培养皿上用细菌画出的彩色“荧光画”。在图中，这些细菌共表达了8种不同的荧光蛋白。 在这之后，科学家们还利用荧光蛋白的种类和基因数量来“调制”颜色。因为通过改变荧光蛋白基因的种类，以及改变基因的拷贝数，科学家们就可以像使用调色盘一样，在细胞中混合出更多颜色。 有了荧光调色盘上的种种色彩之后，科学家们又是如何把众多神经细胞变成绚丽的彩虹的呢？ 大家都知道，如果将不同荧光蛋白对应的基因片段转入细胞，让它们与目标蛋白共同表达，就可以对细胞以及细胞中的特定结构进行标记。但如果仅仅是这样做，我们一般得到只是单一的色彩，或者两三种颜色的图像。虽然在很多情况下，这就已经够了，但要想把数量庞大、错综复杂的神经细胞彼此区分开，我们还需要更新的技术。 能做到这一点的技术出现在2007年，哈佛大学的神经生物学家Jeff W. Lichtman和他的团队做出了这项名叫Brainbow的革命性成果。通过这种技术，他们能让小鼠的神经细胞显示出了几十种不同的色彩。 在这种技术中，研究者们用到了Cre重组酶，即环化重组酶，它是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶。这种酶不需要能量辅助因子，它可以识别催化两个LoxP位点之间发生同源重组，从而造成DNA的缺失、易位等现象。简单的来说，它可以识别特定的DNA序列，并把两个“识别标记”中间的序列删除。研究者们把不同种类（也就是不同颜色）和不同数量的荧光蛋白基因连接在一起，并在他们两段加上了Cre重组酶可以识别的标志序列——LoxP位点。最终，在酶的帮助下，这些基因在细胞内会被随机地“剪掉”一部分，留在细胞中的基因得以表达，这样一来，细胞就可以随机地表达出各种不同的颜色了。原理如下图： 在里奇曼的研究中，这些神经细胞的图像经过计算机分析，一共分辨出了89种不同的颜色，在上面的图像中，98.9%的细胞都展现出了不同的颜色。而现在的Brainbow已经能够产生多达166种可分辨的颜色。 说到这种技术最大的作用，就是将某些需要研究的细胞与错综复杂的背景区分开来。通过对不同色彩的分析，可以对细胞进行计数，也可以追踪细胞的走向，观察神经网络的连接布局以及细胞之间的相互作用。 这条五光十色的“长蛇”其实是小鼠的视神经，连接着眼睛与大脑，负责传输视觉信号。 除了小鼠之外，Brainbow在其他模式生物身上也同样行得通。在这张图中就展示了经过荧光标记的果蝇神经网络。 这个看起来像烟花一般的结构是小鼠的视网膜神经节细胞，它接收来自视网膜视锥细胞和视杆细胞的信号，并参与视觉信号的传递。 虽然是为研究神经细胞所设计，但Brainbow技术同样可以点亮其他类型的细胞。在这张图中，被染上色彩的是小鼠舌头的肌纤维。 资料来源： 1.