植物组织培养中遇到的问题和解答.docVIP

植物组织培养中遇到的问题和解答 1 ?为什么顶端分生组织没有病毒，生长的好？ 病毒在寄生植物体内随维管束系统转移，在茎尖分生组织中没有 维管束系统，病毒运动困难，其移动速度落后于茎尖生长速度，导致 顶端分生组织附近病毒浓度低，甚至不带病毒。、①在植物体内，病 毒是通过维管束系统移动的，分生组织不存在维管束系统。 病毒在细胞间移动的另一个途径是通过胞间连丝移动，速度较慢， 难以赶上茎尖分裂旺盛的分牛细胞。 分裂旺盛的分生细胞代谢活性强，使病毒无法复制。 超净工作台的工作原理？ 将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经过高效 空气过滤器精滤，市此送出的洁净气流从一定的均匀的断面风速通过 无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。将空气通过由特制 的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清器”后吹送出来，形成连 续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“高效的特殊空气”，它 除去了大于0?3 uni的尘埃、真菌和细菌孑包子等等。超净空气的流 速为2 4~3 Om/m i n,这已足够防止附近空气可能袭扰而引起 的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯或本牛灯对器械等的灼烧 消毒。 植物组织培养中培养液中的碳源为什么蔗糖最好，为何不用单糖? 螯合铁有何好处? 植物在光合作用后合成的碳水化合物一般以蔗糖和淀粉形式储 存，蔗糖可以储存也方便转运，且植物利用蔗糖的系统很完善，因此 培养基用蔗糖。培养基中添加蔗糖而不是葡萄糖，是以大量实验为基 础的。大量实验表明，蔗糖能支持绝大多数植物离体培养物的旺盛生 长，因此被作为植物组织培养的标准碳源而广泛应用，大多数合成培 养基也均以蔗糖作为唯一的碳源。其中的原因可能有下列儿个方面： ①同样作为碳源和能源物质，蔗糖较葡萄糖能更好地维持培养基内的 低渗环境。配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低 于葡萄糖，若采用葡萄糖作为碳源，易使植物细胞脱水而牛长不良。 同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，所以 蔗糖形成的渗透压可较长时间地保持相对稳定。②植物组织培养过程 中，要特别注意防止培养基受到微生物的污染。微生物生长所需的碳 源最适合的是葡萄糖，而较少利用蔗糖，因此采用蔗糖作为培养基的 碳源，可在一定程度上减少微生物的污染。③从能源供应来说，相同 物质的量浓度下，蔗糖比葡萄糖提供的能量多。 使用螯合铁的目的：避免沉淀；缓慢不断地供应铁。 培养基为什么不能太软？ 培养基太软，材料在培养基中不稳定，甚至下沉，从而影响组织 的呼吸。培养基的硬度可能受到所用琼脂的质量、培养基pH及无机 盐浓度的影响，灭菌时间过长也回导致培养太软。 至少5种灭菌剂的灭菌原理? 1?氯化汞 氯化汞也称升汞，是一种剧毒的重金属盐杀菌剂，其 杀菌的原理是Hg2+可与带负电荷的蛋白质结合，使细菌蛋白变性， 酶失活。氯化汞使用浓度为0. 1%?0. 2%,浸泡8?15分钟，就可以 有效地杀死附着在外植体表面的细菌及真菌芽抱，灭菌效果极好。 但用氯化汞灭过菌的外植体材料要用无菌水反复多次洗涤（一般不少 于5次），才可将残留的药剂除净。使用氯化汞会给环境造成污染， 一般情况下，应尽量用其它消毒剂灭菌，而以少用或不用氯化汞为宜。 2?次氯酸钠 市售次氯酸钠又称为“安替福民”，活性氧含量是 0. 8%,使用时稀释3?5倍，浸泡外植体5~30分钟后，再用无菌水 洗涤4?5次。它分解出具有杀菌作用的氯气，灭菌后易于除去，不 留残余，杀菌力强，对植物材料无害，是植物组织培养常用的杀菌剂 之一。 3?漂白粉 漂白粉为白色的粉末，一般含10%?20% （质量/体 积）的次氯酸钙：Ca（C102）］,使用时用饱和溶液，杀菌的原理在于它 分解岀具有杀菌作用的氯气。氯与蛋白质中的氨结合，使菌体蛋白质 氧化，代谢功能发生障碍。注意漂白粉腐蚀金属、棉织品，刺激皮肤, 易吸潮散失有效氯而失效，平时要密封储藏，最好现配现用，不要储 藏太久。 4?酒精 酒精（乙醇）具有较强的穿透力和杀菌力，它使细菌蛋 口质变性。使用的浓度一般为70%?75%。处理时间15?30秒，不宜 太长，因为细胞容易收缩脫水。它具有浸润和灭菌的双重作用，使用 于表面消毒，但不能达到彻底的灭菌，必须结合其它药剂灭菌。 为了提高乙醇的杀菌效果，可在乙醇溶液中加入0.1%的酸或碱，以 改变细胞表面带电荷的性质而增加膜透性，提高乙醇的灭菌效果。 5.高镒酸钾 高镒酸钾的灭菌原理在于它能使细菌酶蛋白中的疏 基氧化成二硫基而失去酶活性。浓度稀时起氧化作用杀死细菌，日常 生活中通常用作皮肤、果蔬的表面消毒剂，在一盆清水中加入几粒高 猛酸钾就可起到杀菌的作用。 植物组织培养中脱除病毒的方法及其优缺点。 热处理是利用病毒和寄主植物对高温的忍耐性的差异，使植物的 生长速度超过病毒的扩散