等温双链核酸扩增检测新技术研究-分析化学专业论文.pdf.docxVIP

等温双链核酸扩增检测新技术研究学位论文完成日期： 等温双链核酸扩增检测新技术研究 学位论文完成日期： 硼肽、o友让 指导教师签字： 答辩委员会成员签字： 万方数据 青岛科技大学研究生学位论文等温双链核酸扩增检测新技术研究 青岛科技大学研究生学位论文 等温双链核酸扩增检测新技术研究 摘要 核酸扩增技术是生化分析检测的热门研究领域，迄今为止已经发展出了众多 基于核酸扩增的检测方法。聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction，PCR)及 其衍生技术，需要经过循环的变温过程，对仪器依赖性强，在现场快速检测等领 域的应用具有一定的局限性；因此，发展简便快速、灵敏准确的等温核酸扩增技 术具有非常重要的意义。本论文中，在以往链置换扩增的基础上，丁完全等温条 件下建立了一种指数式扩增检测双链核酸的新方法，并对该类型反应所出现的非 特异性扩增进行J，研究。 本论文中，将切刻酶和聚合酶联合使用，在完全等温的条件下建立了一种扩 增检测双链核酸的新方法。该方法实现了单链靶标的产生与扩增在封闭体系中及 同一温度下进行，不需要额外的预变性等操作步骤，’方法简便快速，灵敏准确。 应用该方法对pBluescript II KS(+)质粒(简称为PBS质粒)DNA进行了检测， 当目标DNA浓度为1．0 fmol到1．0 zmol时，检测结果具有良好的线性关系；并 且方法在复杂体系进行检测时，也表现出了较好的稳定性。为了检测该方法的实 际应用能力，本论文对副溶血性弧菌进行了检测，结果显示，该方法可以将约100 zmol的基因组DNA检测出来，证明了本方法具有一定的实际应用能力。 为了进一步提高应用本方法检测副溶血性弧菌的灵敏度，本论文探讨了应用 分子信标代替Sybr Green I进行信号检测的可行性；同时，为了探究该类型反应 出现非特异性扩增的原因，本论文对含有切刻酶识别序列的引物所引起的非特异 性扩增进行了研究，同时结合前人的研究成果进行了开放性探讨，总结出了一些 经验，为进一步的研究提供了基础的资料。 关键词指数链置换扩增双链核酸检测等温扩增切刻酶DNA扩增技术 万方数据 青岛科技大学研究生学位论文STUDY 青岛科技大学研究生学位论文 STUDY 0N THE NEWⅣ【ETHOD 0F IS 0THEI洲AL DOUBLE STRANDED NUCLEIC ACIDS AMPLIFICATl0N AND DETECTl0N AB STRACT Nucleic acids amplification technology is a hot area of biochemical analysis，and many methods based nucleic acids amplification for detection has been developed． Polymerase chain reaction(PCR)and its derived technologies need repeated heating and cooling processes，which greatly depend on complicated instrument．So，they have some limitations when applied in the field of rapid detection．It is very important that the development of isothermal nucleic acid amplification are developed for simple， rapid，sensitive and accurate detection．In this paper，based Oil traditional strand displacement amplification，a method for double stranded nucleic acids amplification and detection in isothermal conditions was established，and the non．specificity amplification appeared in this type of reaction was studied． In this paper，coupled with nicking enzyme and polymerase，a new method for double stranded nucleic acids isothermal amplification and detection was establ