饮用水中隐孢子虫qPCR检测研究.PDFVIP

第 ３８卷第 １１期 环　 境　 科　 学　 学　 报 Ｖｏｌ．３８，Ｎｏ．１１ ２０１８年１１月 　Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ Ｎｏｖ．，２０１８ ＤＯＩ：１０．１３６７１／ｊ．ｈｊｋｘｘｂ．２０１８．０２５４ 李春格，李红岩，李罗英，等．２０１８．饮用水中隐孢子虫ｑＰＣＲ检测研究［Ｊ］．环境科学学报，３８（１１）：４２４３⁃４２４９ Ｌｉ Ｃ Ｇ，Ｌｉ ＨＹ，Ｌｉ Ｌ Ｙ，ｅｔ ａｌ． ２０１８．Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｑＰＣＲ ａｓｓａｙ ｉｎ ｄｒｉｎｋｉｎｇ ｗａｔｅｒ ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ，３８（１１）：４２４３⁃４２４９ 饮用水中隐孢子虫ｑＰＣＲ检测研究 １，∗ １ １ １ １ ２ 李春格 ，李红岩 ，李罗英 ，于志勇 ，杨敏 ，孔维栋 １．中国科学院生态环境研究中心，中国科学院饮用水科学与技术实验室，北京１０００８５ ２．中国科学院青藏高原研究所，高寒生态学与生物多样性实验室，北京 １００１０１ 收稿日期：２０１８⁃０４⁃２２　 　 　 修回日期：２０１８⁃０６⁃０７　 　 　 录用日期：２０１８⁃０６⁃０７ 摘要：分子生物学的发展推动了分子技术在病原体检测诊断中的应用，建立成熟可靠的饮用水中隐孢子虫的分子检测方法也迫在眉睫．本研究 直接提取饮用水浓缩液ＤＮＡ，对隐孢子虫卵囊目的基因进行定量ＰＣＲ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ，简称ｑＰＣＲ）检测，并对该体系进行了综合优化．本研 究比较了不同冻融处理及不同ＤＮＡ提取试剂盒对隐孢子虫卵囊ＤＮＡ提取效果，结果显示，ＱＩＡａｍｐ ＤＮＡ Ｍｉｎｉ ｋｉｔ配合冻融前处理（液氮／ 沸水 ５个循环）提取ＤＮＡ含量较高，用这种方法可以提取到（４±１）个隐孢子虫卵囊ＤＮＡ．本研究比较了隐孢子虫ＳＹＢＲｇｒｅｅｎ染料法及Ｔａｑｍａｎ探针 报 法ｑＰＣＲ，结果显示，探针法和染料法均可以检测到１０个 １８Ｓ ｒＲＮＡ基因拷贝（一个隐虫卵囊含有２０个 １８Ｓ ｒＲＮＡ基因拷贝）．采用该检测体系 测定的去离子水和水源水中隐孢子虫的加标回收率分别达到了５５％和４６％；本研究提供了饮用水中隐孢子虫检测的一种可行性分子方法． 关键词：饮用水；隐孢子虫；定量ＰＣＲ 文章编号：０２５３⁃２４６８（２０１８）１１⁃４２４３⁃０７　 　 　 中图分类号：Ｘ８３２　 　 　 文献标识码：Ａ 学 Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｑＰＣＲ ａｓｓａｙ ｉｎ ｄｒｉｎｋｉｎｇ ｗａｔｅｒ １，∗ １ １ １ １ ２ ＬＩ Ｃｈｕｎｇｅ ，ＬＩ Ｈｏｎｇｙａｎ ，ＬＩ Ｌｕｏｙｉｎｇ ，ＹＵ Ｚｈｉｙｏｎｇ ，ＹＡＮＧ Ｍｉｎ ，ＫＯＮＧ Ｗｅｉｄｏｎｇ １． Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｄｒｉｎｋｉｎｇ Ｗａｔｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｅｃｏ⁃Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８５ 学 ２． Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｌｐｉｎｅ Ｅｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｉｂｅｔａｎ Ｐｌａｔｅａｕ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１０１ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ ２２ Ａｐｒｉｌ ２０１８；　 　 　 ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎ ｒｅｖｉｓｅｄ ｆｏｒｍ７ Ｊｕｎｅ２０１８；　 　 　 ａｃｃｅｐｔｅｄ７ Ｊｕｎｅ２０１８ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ