第二章DNA合成课件.ppt

D环复制 H链为模板，从OH开始； 新的L链取代原来的L链与H链互补结合；原来的L链呈D环； 至1/3时暴露OL，起动以L链为模板的复制； 复制完成，以环状双螺旋形式释放，形成两条环形DNA分子。 第四节 病毒DNA的复制 滚环复制 滚环复制 σ模式过程 “＋”链产生缺口→RFⅡ； 以“－”链为模板，DNA聚合酶Ⅲ催化延伸反应； “＋”链被置换； 第七节 DNA的逆转录合成 逆转录（reverse transcription） 以RNA为模板，以dNTP为原料， 在逆转录酶催化下合成DNA的过程 一、逆转录酶 逆转录酶的活性 RNA指导的DNA聚合酶活性； RNAaseH活性，即从5’→3’或3’→5’水解DNA-RNA杂交分子中的RNA。 DNA指导的DNA聚合酶活性； 逆转录酶活性 依赖RNA的DNA聚合酶 核糖核酸酶H活力 依赖DNA的DNA聚合酶 二、逆转录病毒基因组 反转录病毒RNA的末端是正向重复序列。 反转录病毒线型DNA的末端是LTRs 整合到宿主DNA中时，两端各丢失了2 bp 翻译区 长末端重复序列 引物结合位点PBS 三、逆转录过程 逆转录病毒基因组为正链RNA。 宿主tRNA 与U5互补，作为合成DNA负链的引物。 生成DNA-RNA杂交双链片段，含U5和R互补序列； 三、逆转录过程 R U5 U3 R R U5 R U5 U3 R U3 R R U5 U5 U3 R U5 RNAaseH水解DNA-RNA杂交双链中RNA模板5’端的一段RNA；（包括R序列和U5） 新合成的DNA负链从模板RNA的5’端跳到3’端，通过R序列形成杂交链；（第一次跳跃） DNA负链向5’端延伸； 三、逆转录过程 RNAaseH将tRNA引物水解切除； DNA-RNA杂交双链中绝大部分RNA被水解； 以剩余的一段RNA作为引物合成DNA正链的3’端；（包括U3、U5 、R和PBS序列） U3 R U3 R U3 R U5 U3 R U5 U3 R U5 R U5 R U5 U5 U5 U5 U5 U5 U5 U3 R U5 U3 R U5 U3 R U5 U3 R U5 U3 R U5 U3 R U5 U3 R U5 U3 R U5 U3 R U5 U3 R U5 U3 R U5 三、逆转录过程 以残留RNA片段为引物合成DNA正链3’端。 DNA正链的3’端跳到DNA负链的3’端，以PBS互补形成局部双链。 延伸完成DNA正链的合成。 完成DNA双链合成 逆转录病毒的生活周期 RNA 衣壳 被膜 逆转录酶 转录 转译 整合入宿主细胞染色体DNA 进入细胞 丢失被膜 丢失衣壳 逆转录 RNA RNA cDNA 衣壳蛋白 被膜蛋白 逆转录酶 反转录病毒整合入宿主DNA中的分子机制，其本质是转座 四、逆转录研究的意义 扩充了中心法则内容 有助于对病毒致癌机制的了解 与真核细胞分裂和胚胎发育有关 逆转录酶是分子生物学重要工具酶 逆转录病毒与疾病 逆转录病毒可以通过反向转录整合到宿主的染色体中形成相应的前病毒，这些病毒和前病毒的基因产物可以致癌。 癌基因（oncogen）：是人类或其它动物基因组中含有的基因，一旦被激活，便能导致正常细胞发生癌变。 细胞癌基因（cellular oncogene，c-one）：人和动物细胞中的癌基因； 原癌基因（roto-oncogene）：未活化的c-one； 病毒癌基因（virus oncogene，v-one）：病毒基因组中的癌基因； FEN1 侧向内切核酸酶; RP-A 复制蛋白A,与单链DNA结合 PCNA,增生细胞核抗原,负责将DNA多聚酶δ征召到DNA新链的复制位置 原核生物线性DNA复制的终止机制还不清楚 如图所示是一个末端结构模型。它提出存在一个由G重复单位组成的G 基四重线。图中每个连续T2G4单位的第二个G组成了这个四重线一部分，剩下的重复单位呈环状突出，G基要粒连在一起必须要改变其中两个与糖类有关的碱基的方向（从通常的反式改为不常见的顺式结构）。既然每个重复序列有不止一个G，那么如果其它G基也连在一起，则会有不止一个四重线可以形成，这些四重线可能以螺旋的形式相互堆积在一