斑蝥穴位敷贴治疗小鼠胶原性关节炎的初步观察.PDFVIP

斑蝥穴位敷贴治疗小鼠胶原性关节炎的初步观察 方剑乔 刘金洪 赵天征 阮继源 陈海英 (浙江中医学院针灸推拿系 杭州 310053) E-mail fangjianqiao@ 摘要 采用与类风湿性关节炎特征相似的小鼠胶原诱导性关节炎(Collagen- induced arthritis, CIA ) 模型, 以关节炎发病率、关节炎指数、抗Ⅱ型胶原(C) 抗体水平、组织病理学改变等 为指标, 观察了斑蝥膏穴位敷贴(天灸) 对此模型的影响,并检测了胶原免疫小鼠脾脏白介素 -1β水平。结果显示: 督脉经穴斑蝥敷贴治疗, 能明显抑制小鼠CIA 的发生, 显著降低关 节炎指数, 抗CII抗体水平和组织病理改变指数。同时表明此方法对CIA的治疗作用与抑制 内源性IL-1β的产生有关。 关键词 类风湿性关节炎 胶原 斑蝥 穴位 敷贴已知型胶原免疫接种可引起大小鼠炎症性多发性关节炎, 胶原诱导 性关节炎(Collagen induced Arthritis, 简称CIA ) 表现为动物足爪的严重肿胀, 关 节局部炎症细胞的大量浸润, 疾病发展可引起关节滑膜增生, 关节破坏和变性。 由于CIA 其临床表现、组织病理变化、体液和细胞免疫应答与人类风湿性关节炎 的特征接近, 目前被认为是最适合类风湿研究的动物模型。现有大量证据表明, 抗型胶原抗体在本病的发生中起着重要作用。同时外周注射白细胞介素-1β(IL- β) 可增加CIA的发病率和加重病情; Wooley 等发现抗IL-1β抗体可减少CIA 的 发病, 说明IL 21B与C IA 的发生及关节破坏有关。类风湿性关节炎由于有较高 的发病率和致残率, 已成为世界性攻关项目之一, 国内外有大量药物治疗本病的 临床报道和实验研究。目前的抗风湿药或因疗效不十分满意, 或因毒副作用太大, 难以推广或长期使用。针灸疗法已被广泛地用来治疗本病, 尤以直接灸(包括铺 灸) 和温针灸为多用, 疗效报道不一。我们曾在临床初步观察到斑蝥穴位敷贴进 行发泡能有效地控制类风湿性关节炎的病情。为客观地反映天灸疗法的治疗作用, 我们采用小鼠胶原诱导性关节炎模型, 观察了斑蝥膏在督脉经穴敷贴治疗, 对 CIA 发病情况与病情、抗体水平及脾脏IL-1β水平的影响。 1 材料与方法 1.1动物 实验采用7周龄雄性DBA/1J小鼠, 体重18±2g, 由日本生物材料公司提 供 1.2 造模 取适量牛型胶原(美国Sigma公司),溶于0.01M 乙酸中(4mg胶原/ml),与等量 福氏完全佐剂在冰溶下充分乳化，每只小鼠以0.1m l (含200mg)乳剂,于尾根部 - 1 - 作皮内注射。第21天再用等量胶原经福氏不完全佐剂乳化,加强免疫1次。 1.3 治疗 采用斑蝥膏作穴位敷贴(发泡)治疗, 施灸部位为鼠背部正中相当于督脉经, 选穴相当于命门和至阳。以纯斑蝥粉按1:4比例与凡士林混合，做成斑蝥膏。小 鼠穴位表面去毛后，以每次含斑蝥粉3mg 量的斑蝥膏涂在穴位表面皮肤上,再用 胶布双层固定。每次一穴,固定时间为18小时。每周施治二次,交替用穴。 1.4 关节炎指数评估 Wood氏的关节炎评估标准，作关节炎指数评分。0 分: 正常；1：分:红肿涉 及1 个指关节；2 分：红肿涉及2个以上指关节或整个足爪轻度红肿；3 分: 足 爪红肿较重；4 分：足爪重度红肿，关节僵硬、缺乏弹性。4 只足爪中每只爪的 损害都分为0-4计算四肢的总积分。每组鼠发生关节炎的肢体数以百分率表示, 并比较不同时间的积分(关节炎指数)。关节炎的发病率和关节炎的起病时间也同 时记录。 1.5 抗C胶原抗体测定 在乙醚麻醉下, 通过眶底或心脏穿刺采取小鼠血样, 离心取血清。血清抗C 抗体水平的测定采用小鼠ELISA药盒。测定方法为:先用缓冲液洗板3次,然后加 100ul中止缓冲液在室温下培养1小时, 再冲洗3次。小鼠待测血清1:10000倍稀释 后(100ul) 分别加入相应培养孔,室温下培养2小