草鱼肝细胞系中CYP3A活性检测方法Analysisof-上海海洋大学学报.PDF

第 16 卷第5 期 上海水产大学学报 Vol. 16 , No.5 2007 年9 月 JOURNAL OF SHANGHAI FISHERIES UNIVERSITY Sep. ,2007 文章编号: 1004 - 7271 (2007 ) 05 - 0495 - 05 .研究简报· 草鱼肝细胞系中 CYP3A 活性检测方法 李 们 时 杨先乐1 ， 2 张书俊 喻文娟 小 仲 扩 ·E Z L E 酌 b 立 原 (1.上海水产大学农业部渔业动植物病原库，上海 200090; 2. 上海高校水产养殖学 E-研究院，上海 200090) 摘 要:红霉素-N-脱甲基酶(ERND) 是细胞色素 P450 3A( CY凹A) 依赖的酶类，可通过测定该酶催化代谢产 物甲酶的量来反映其活性，从而评价 CYP3A 活性的高低。以草鱼肝细胞系(GCL) 为模型，红霉素为底物，采 用 Nash 比色法检测 ERND 产物甲醒含量，Lowry 比色法测定细胞蛋白含量，建立鱼类细胞中 CYP3A 活性的简 便检测方法。研究表明，底物以 0.4 mmoVL 作用60 min 后进行检测较为合适。细胞样品中 ERND 产物甲醒 平均回收率为78.80% :t 4. 37% ，平均日内精密度为2.80% :t 1.40% ，平均日间精密度为3.91% :t1. 45 1;l毛，通 过计算探针酶ERND 活性可为鱼类细胞 CYP3A 活性的评价提供简便可靠的方法，从而为鱼类药物代谢酶体 外诱导模型的研究奠定了基础。 关键词:细胞色素 P4503A; 红霉素-N-脱甲基酶;鱼类;细胞;甲醒 中图分类号:S 917 文献标识码:A Analysis of the activity of cytochrome P450 3A in grass carp liver cell line 1 1 2 1 1 1 LI Dan , YANG Xian-le • , ZHANG Shu-jun , YU Wen-juan , CHEN Yu (1. Aql皿tic Pathogen Collection Center 01 Ministry 01 Agricultu时 ， Shanghai Fisheries University , Shanghai 200090 , China; 2. E-Institute 01 Shanghai Municipal Educαtion Commission , Shanghai 200090 , China) Abstract :The activity of erythromycin N -demethylase , whose catalysate is formaldehyde , can indicate the activity of cytochrome P450 3A (CYP3A). A simple method of determination of the activity of CYP3A in grass carp liver cell line (G4) was established. The study showed that the appropriate co