下调Perilipin1基因表达对3TL1细胞脂解的影响-北京玛格泰克科技.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６，３６（３）：１７２２ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 下调Ｐｅｒｉｌｉｐｉｎ１基因表达对３Ｔ３Ｌ１ 细胞脂解的影响 赵志武　王君实　马　敏　张少华　燕　炯 （山西医科大学公共卫生学院　太原　０３０００１） 摘要　目的：研究下调围脂滴蛋白基因（ＰＬＩＮ１）表达对３Ｔ３Ｌ１细胞脂解的影响。方法：采用ＲＮＡ 干扰技术，构建３组阳性及 １组阴性 ｓｈＰＬＩＮ１重组载体，并进行菌液 ＰＣＲ和 ＤＮＡ测序鉴定。 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ测定ＰＬＩＮ１Ａ蛋白表达，评价载体下调效果。细胞转染有效载体２天后，Ｂｏｄｉｐｙ４９３／ ５０３染色脂滴；酶学方法测定细胞中甘油三酯和甘油含量；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测甘油三酯脂肪酶 （ＡＴＧＬ）、激素敏感性脂肪酶（ＨＳＬ）及其磷酸化蛋白（ｐＨＳＬ）的表达。酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ） 测定细胞中环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）和蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）的浓度。结果：各ｓｈＰＬＩＮ１干扰载体构建成 功，且３组阳性载体均能显著下调ＰＬＩＮ１Ａ蛋白的表达（Ｐ＜０．０５）。转染有效载体后，与阴性转染 组相比，ｓｈＰＬＩＮ１转染组细胞中脂滴减小，甘油三酯含量降低，甘油含量升高，ＡＴＧＬ和 ＨＳＬ相对 表达量显著升高（Ｐ＜０．０５），ｐＨＳＬ相对表达量及ｃＡＭＰ、ＰＫＡ的浓度无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。 结论：下调ＰＬＩＮ１基因表达可加快３Ｔ３Ｌ１细胞脂解速率，其可能通过上调ＡＴＧＬ和ＨＳＬ的表达而 实现，ｃＡＭＰ／ＰＫＡ信号通路对其无明显调节作用。 关键词　围脂滴蛋白　ＲＮＡ干扰　细胞转染　３Ｔ３Ｌ１前脂肪细胞　脂解 中图分类号　Ｑ５９１．５ 　　研究认为，肥胖症的发生与脂质代谢紊乱密切相 关基因和蛋白质表达的生物技术，已广泛应用于生物 ［１２］ 医药领域。本次研究通过ＲＮＡｉ技术下调ＰＬＩＮ１基因 关 。在细胞水平，脂滴作为能量储存的主要细胞 器，富含甘油三酯，在脂类合成及分解过程中发挥重要 的表达，探讨其对３Ｔ３Ｌ１细胞脂解变化的调节机制，为 作用。围脂滴蛋白（Ｐｅｒｉｌｉｐｉｎ１，ＰＬＩＮ１）作为脂滴表面 进一步研究ＰＬＩＮ１与脂代谢之间的关系，以及为相关 蛋白中的重要一员，可双向调节脂肪分解，与脂代谢性 新药研制提供实验支持。 ［３５］ 疾病、心血管疾病等的发生、发展密切相关 。近年 １　材料与方法 来的研究发现，阻断ＰＬＩＮ１基因表达的小鼠脂肪堆积 ［６７］ １．１　材　料 减少，体重下降，可抵制高脂膳食诱导的肥胖症 ，因 １．１．１　主要试剂和细胞　ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＬＴＸ＆ＰＬＵＳ、 而ＰＬＩＮ１基因可作为研究肥胖症的靶点。 Ｂｏｄｉｐｙ４９３／５０３购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；ＰＬＩＮ１Ａ、ＡＴＧＬ、 　　在肥胖症体外实验研究中发现，ＰＬＩＮ１可保护脂滴 ＨＳＬ和ｐＨＳＬ抗体购自Ａｂｃａｍ公司；牛胰岛素、地塞米 中的甘油三酯不被脂肪酶分解，并且可通过 ＦＳＰ２７的 松、１甲基３异丁基黄嘌和 Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８购自Ｓｉｇｍａ ［８］ 激活而调节脂代谢 。另外，沉默ＰＬＩＮ１基因可加快 公司；ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基、胎牛血清、ＢＣＡ试剂盒、羊抗 脂解，