tcr免疫组库对食管鳞癌免疫治疗的指导研究内科学消化系病专业论文.docxVIP

山东大学硕士学位论文CATALOGUE 山东大学硕士学位论文 CATALOGUE Abstract in Chinese．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3 Abstract in English．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5 Symbolic description．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7 Preface．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9 Materials and Method．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1：! Results ． ． ． ． ．．．．．． ． ．． ．．． ．．：16 Discussion．．．．．． ．．．．．．．． ．．． ．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36 Conclusion．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40 References．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．z11 Acknowledgment 44 Publication．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46 2 万方数据 山东大学硕士学位论文TCR免疫组库对食管鳞癌免疫治疗的指导研究 山东大学硕士学位论文 TCR免疫组库对食管鳞癌免疫治疗的指导研究 研究生：陈增超 导师：陈自平教授 山东大学医学院 山东大学附属千佛山医院 中文摘要 研究背景 食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，据统计2012年全世界大约有 455，800新发病例，因食管癌死亡人数达到400，200。亚洲东部和非洲东南部属 于发病率较高地区，我国的发病率约为20／10万。食管癌病理类型主要为鳞癌和 腺癌，我国90％以上为食管鳞癌(oesophageal squamous cell carcinoma，ESCC)。 由于缺乏有效的治疗手段使食管癌预后较差。应用肿瘤浸润淋巴细胞(tumour infiltrating lymphocytes，TILs)的免疫疗法在一些实体瘤病人中取得持久的疗效， 提示我们免疫治疗应用于临床治疗ESCC的可能性。由于对食管癌(TILs)的克 隆性、特异性和空间异质性等基本生物学特征所知甚少，因此有必要对T细胞受 体(T cell receptor，TCR)与肿瘤抗原相互作用进行深入解析。 目的 通过对食管鳞癌DNA提取物直接进行T细胞受体B链(T-cell receptor beta．chain，TCRb)深度测序，评估这种方法对肿瘤内T细胞克隆性和空间异质 性的透析能力。 材料和方法 我们的研究纳入7例病理诊断为食管癌的患者，通过手术收集肿瘤组织、癌 旁正常组织及外周血标本，每例肿瘤组织按标准选取4-6个区域。组织石蜡切片 判断CD3+T细胞的存在情况。通过多重PCR捕获和Illumina Hiseq2000测序平 台对TCRb互补决定区3(complementarity-determining region，CDR3)区进行深 度测序并分析。同时我们将Patient 1肿瘤组织4个区域DNA提取物进行复测， 评估抽样误差及测序技术引入的误差。 结果 万方数据 山东大学硕士学位论文7例ESCC患者每个样本测序所获得独特的TCRb序列(unique 山东大学硕士学位论文 7例ESCC患者每个样本测序所获得独特的TCRb序列(unique TCR p reads) 数量是相似的，平均为99，899(四分位数间距为75，525—155，647)。所有的组织 及血液样本中均可检测到大量T细胞克隆扩增，且肿瘤组织与正常组织T细胞 克隆扩增性没有