清洁验证中的TOC分析.docVIP

　　清洁验证中的TOC分析 　　通过考察中药制剂产品清洁限度计算和总有机碳法的分析方法验证等方面，可以评价总有机碳法在清洁验证中的使用。总有机碳仪灵敏度高、速度快，通过制定合理的限度，可以满足清洁验证的要求。该方法计算了所有有机碳，选取了更为严格的标准。总有机碳法可以用于中药制剂的清洁验证。 　　保持药品制剂设备的清洁是有效防止污染和交叉污染，保证药品质量的重要举措。清洁验证是可证明用于直接与产品接触的设备表面的清洁程序具有再现性和有效性的书面证据，其实施情况也已成为国内外GMP认证及FDA认证检查的重点关注项目。鉴于中药制剂产品具有成分复杂、有关成分含量难以测定、杂质不易检出、毒理学研究数据少的特点，中药制剂企业在开展清洁验证中，常面临选择目标化合物及合适的分析方法的难题。 　　总有机碳分析法最早被作为水质量控制的检测手段，其原理是通过反应系统将供试品中的有机物氧化分解生成CO2，CO2进入非分散红外检测器吸收转化为检测信号，通过仪器自动计算出供试品溶液的总有机碳(TOC)浓度值。与HPLC、UV、酶联免疫法检测方法相比，总有机碳分析法具有灵敏度高、检测快速、检测成本低等优点，广泛应用于药品生产清洁验证过程。 　　中药制剂产品成分复杂，但其成分多为生物碱类、糖类、有机酸类等有机物质，因此，TOC法应用于清洁验证在原理上是可行的。本文从中药制剂清洁验证中TOC的适用范围、接受标准及限度值计算、TOC测定方法及取样方法、分析方法学验证4个方面进行了探讨。 　　适用范围 　　清洁验证中对残留物的控制通常采用HPLC、UV、GC等方法。这些分析方法对特定化合物或其官能团均有响应，属于专属性检测方法。这些传统方法的灵敏度往往受限于检测器，实验准备过程和分析时间比较长。而总有机碳分析法与传统分析方法不同，属于非专属性检测方法，其灵敏度可达1ppb(C)，且具有样品制备简单，分析速度快等特点。在中药制剂生产清洁验证中，中药制剂产品成分较复杂，目标化合物不易选择，但其成分多为生物碱类、糖类、有机酸类等有机物质，通过总有机碳分析法很容易测得清洁后的有机物质残留量。 　　虽然TOC方法专属性不强，但其不是仅仅计算单一物质，而是将所有有机碳计算在内，事实上对于清洁验证选取了更为严格的计算方式，不会因残留物未检出而产生质量风险。TOC的另一个不足是无法分析无机物，一般中药制剂活性成分基本为有机物，影响较小，在清洁验证实施之前，应对药品原辅料成分进行分析和评估。 　　目前TOC在生产清洁验证中仅适用于水溶性物质，对于水中易溶物质可以有效检出。对于水中微溶和不溶物质，其在室温下的溶解度在100~10000ppm的范围内，远高于TOC的灵敏度，故TOC用于此类物质的清洁验证也具有可行性。 　　接受标准及限度值的确定 　　TOC法是利用化合物中碳含量来实现定量分析的一种分析方法。中药制剂产品成分复杂，各成分比例波动也比较大，不同成分有机碳的响应值也不同，其含碳量无法用具体的化学结构式计算得到，因此，目标化合物碳百分含量的确定是制定接受标准和限度的第一步。 　　国外已经有一些相关研究。Chris Glover发表的关于总有机碳法分析白蛋白方法学的研究中，通过对1份样品的3次平行测定结果来确定样品浓度与TOC值之间的对应关系。此方法在清洁验证中使用时，在每次测试前，需要先建立目标化合物浓度与实测TOC值之间的线性关系来评价清洁验证样品中目标化合物的含量。Andrew Walsh在处理清洁验证中实测残留量的分析中引入了统计学的分析方法，将日常检控的残留量进行SPC分析，残留量检测结果呈正态分布，在样本平均值的基础上，加上3或4个σ作为清洁验证的可接受标准。 　　在此研究基础上，可以通过此方法解决中药制剂清洁验证中目标物质碳百分含量不确定的难题。考虑目标物质组分的变化选取不同批次目标物质，分别配制一定浓度的水溶液，分别进行TOC分析测试，经过计算从而得到一个综合模拟的碳百分含量。例如，考察30批次目标物质(中药制剂的原药，如浸膏、干粉等)的浓度C(mg/ml)与TOC值之间的关系，将同一浓度目标物质(不同批次)测得的TOC值，进行SPC分析，可以得到该浓度水平下的TOC样本均值XTOC，及测试的标准偏差σ。计算公式为： 　　A=(XTOC - 4σ)/C 　　其中，A代表目标物质碳百分含量;XTOC为TOC结果平均值;σ标准偏差;C为目标物质浓度。另外，为保证清洁验证结果可靠，选取较为严格的4σ下线区间进行计算，分布概率分别为3σ：99.73%，4σ：99.99% ，如图1。 　　现有的清洁验证指南中，并未明确规定清洁验证中的残留物限度。一般有3个指导原则：一是目视无可见残留物;二是上一批产品的残留物质全部溶解到下一批产品中所致浓度不得高于10ppm;三是最低日治