大熊猫肠道产纤维素酶益生芽孢杆菌的分离与利用微生物与生化药学专业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经 发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑兰堡盔些本堂或其他教育机构的学位或 证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示诱|意。 学位论文作者签名：诫红敏 签字目期： 劢『6年易月6日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解塑皇垦盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。 本人授权塑兰垦盔些盔鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：试红敏 导师签名： 拶，，?y 签字日期：询f6年6月6日 签字日期：动陪年6月‘日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 万方数据 摘要大熊猫(Ailuropoda 摘要 大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)能够消化利用箭竹(Fargesia)中纤维素类物 质，但目前尚未在大熊猫基因组中发现编码纤维素酶的相关基因，可见大熊猫消化纤 维素是依赖其肠道中微生物的作用。本研究旨在从大熊猫粪便中分离筛选出产纤维素 酶的芽孢杆菌菌株，为纤维素的发酵利用提供菌种资源。 本文首先从大熊猫粪便中分离出具有纤维素降解活性的菌株126株，利用平板扩 散法从中筛选出76株可使刚果红平板产生明显透明圈的菌株。通过纤维素酶酶活测 定，得到8株酶活较高的菌株(CMC酶活力均高于45．00 U／mL)，分别为2N一12、2N．14、 Y-6、Y-10、2N一10、3X．10、2L．24、2L一9。 通过16S rDNA序列分析，结合菌株的形态特征和生理生化试验结果，初步鉴定 菌株2N—12为阿萨尔基芽孢杆菌(Bacillus axarquien)，。2N．14为枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)，Y-6、y-10为西姆芽孢杆菌(Bacillussiamensis)，2N．10、3X．10、 2L．24、2L一9为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。 在不同生长条件下对B．axarquienis 2N．12、B．subtil2N．14、B．siamensis y-10、 B．methylotrophicus 3X．10进行了生长特性及对肠道病原菌的拮抗活性测定，结果显 示，菌株2N．14、Y-10、3X一10均可在pH4．o~7．0的条件下良好生长、且耐胆酸盐， 并对肠道病原菌有较强的抑制作用。 通过单因素试验确定了3菌株摇瓶培养条件下的碳源、氮源、无机盐种类，由 Plackett．Burman筛选确定主要影响因素，结合响应面分析对菌株产芽孢发酵条件进 行优化。优化后2N一14菌株的芽孢产量为3．18×109 CFU·mL一，比优化前的5．39x108 CFU·mL。增加4．90倍；Y-10菌株的芽孢产量为2．52x109 CFU·mL一，比优化前的 8．08x108 CFU·mLo增加2．12倍；3X．10菌株的芽孢产量为3．22x109 CFU·mL～，比优 化前的8．07x108 CFU．mL一1增加2．99倍。 在含水量55～65％的玉米秸秆中添加上述菌剂1．0x109 CFU·kg-1秸秆，厌氧发酵 45 d，开窖后对发酵秸秆进行了感观评价及理化指标检测分析。结果显示，各试验组 和青贮对照组感官评价均为优等；与青贮对照组相比，3个添加不同菌剂试验组的理 化检测指标结果差异显著。其中添加3X．1 0菌剂的试验组发酵效果最优，发酵秸秆的 pH为3．79；乳酸、乙酸含量分别为2．74％、0．65％，比对照组提高了21．78％(氏O．05)、 29．31％(氏O．05)；氨氮／总氮为0．0643，比对照组降低了54．53％(尺O．05)；粗蛋白 含量为6．93％，比对照组提高了10．17％(PO．05)；粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗 涤纤维、酸性洗涤木质素的含量分别为27．47％、47．87％、30．07％、2．07％，与青贮对 照组相比分别降低了29．65％(火O．05)、20．15％(氏O．05)、18．97％(氏O．05)、17．86％ (PO．05)。 对发酵秸秆的有氧稳定性进行了评价。结果显示