产细菌素的乳酸杆菌的分离和筛选养殖专业论文.docxVIP

目录1．2主要培养基及试剂 目录 1．2主要培养基及试剂 12 1．2．1筛选培养基 ．．．． ．．12 1．2．2试验基础培养基 ．，12 1．2．3培养指示菌培养基 13 1．2．4主要仪器及试剂 ．．13 1．3乳酸杆菌的初筛 13 1．3．1乳酸杆菌的分离 13 1．3．2革兰氏染色试验 ．．13 1．3．3耐氧试验 ．．．． ．．13 1．3．4接触酶试验 ．．13 1．4乳酸杆菌的复筛 14 1．4．1发酵液的制备 ，．14 1．4．1．1试验菌发酵离心上清液的制各 ．．14 1．4．1．2指示菌培养液的制各 14 1．4．2抑菌试验 。14 1．4．2．1牛津杯法抑菌试验 ～ 14 1．4．2．2酸排除试验 14 1．4．2．3过氧化氢干扰试验 14 1．4．2．4硫酸铵分级沉淀试验 15 1．5菌种鉴定 ．15 2结果与分析 15 2．1初筛结果 ．15 2．2复筛结果 ．1 5 2．2．1排除酸及过氧化氢结果 ．15 2．1．2饱和硫酸铵分级沉淀试验结果 17 2．3 LZS42B鉴定结果 ．．18 2．3．1 LZS42B菌体形态及镜检结果 18 2．3．2 LZS42B生化鉴定结果 ．．．． 19 2．3．3 16SrDNA鉴定结果 ．21 3讨论 ．．22 3．1乳酸杆菌的初筛 22 3．2乳酸杆菌的复筛 23 3．3菌种的鉴定 ．23 4结{仑 。24 试验二LZS42B菌种特性及其细菌素生物学特性的研究 25 1试验材料及方法 25 1．1试验材料 ．25 万方数据 目录1．2培养基 目录 1．2培养基 ．25 1．3生长瞌线的制作 25 1．4对指示菌的抑菌活性测定 ．．25 1．5产酸能力的测定 26 1．6细菌素生物学性研究 26 1．6．1酶敏感性 ．．26 1．6．2热稳定性 ．．26 1．6．3 pn耐受性 ．26 2结果与分析 26 2．1 LZS42B对金黄色葡萄球菌的抑菌活性与菌液浓度之间的关系 。26 2．2 LZS42B对金黄色葡萄球菌的抑菌活性与菌液pH值之间的关系 27 2．3酶敏感性 ．28 2．4热稳定性 ．29 2．5 pH耐受性 30 3{寸{仑 ．．3l 3．1 LZS42B菌液浓度、pH值与LZS42B抑菌效果之间的关系 ．3l 3．2 LZS42B所产细菌素的生物学特 。32 3．2．1细菌素的耐热性 ．．32 3．2．2细菌素的pH耐受性 32 3．2．3细菌素的酶敏感性 ．．33 4结{仑 一33 试验三LZS42B紫外线(UV)诱变试验 ．．34 1试验材料及方法 34 1．1试验材料 一34 1．2培养基 ．34 1．3对LZS42B菌株进行紫外线(UV)诱变 ．34 2结果与分析 34 3{寸论 ．．35 4结论 ．．35 第三章全文总结 ．．36 参考文献 37 致{射 43 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 本研究旨在从鸡的肠道中分离和筛选出高产绍菌素的乳酸杆菌，并通过选育和 珊化提高其在环境和肠道中的适应性，并提高目标菌株产细菌素能力，为其将来作 为高产细菌素的益生菌提供条件。 本试验一旨在从鸡的肠道中分离和筛选出具有高效抑菌的乳酸杆菌。在无菌的 条件下收集鸡的各肠道内容物，按10倍梯度稀释，选择适宜的浓度接种于改良的 MRS和LBS培养基中，置37℃厌氧培养48 h；挑选能产生明显溶钙圈的单个菌株 进行耐氧试验、接触酶试验及革兰氏染色进行初步筛选，将初步筛选出来的菌株的 发酵离心上清液用牛津杯法做抑菌活性分析，指示菌为金黄色葡萄球菌 (staph，rlococcus aureus简写S．a)、大肠杆菌(escherichia coli简写E．coli及沙门 氏菌(Salmonella EbertheUa简写S．E)；然后通过酸排除试验、过氧化氢干扰试验 及不同饱和度硫酸铵溶液分级沉淀试验筛选出仍有抑菌活性的菌株。结果表明通过 初步筛选得到了23株能产生耐氧阴性、革兰氏阳性及接触酶阴性的菌株；牛津杯法 抑菌活性分析进一步筛选得到了4株对指示菌仍有较强的抑制作用的菌株，分别为 D1，LZS42B，LHS2，MS。并选择LZS42B用法国梅里埃API．50 CHL试剂盒及 16SrDNA进行菌种鉴定，试验结果表明LZS42B为植物乳杆菌(1actobacillus plantarum)。 本试验二旨对菌种鉴定的LSZ42B即植物乳杆菌(1actobacillusplantarum)。分 析菌液浓度、菌液pH值与抑菌活性之间的关系，研究其菌种特性及其所产细菌素的 热稳定性、pH耐受性及酶的敏感性。试验结果表明LSZ42B生长特性为：在0-6 h 为迟缓期，菌数生长缓慢；6～18 h为对数生长期，菌数迅速增加，pH值也迅速降低， 而