2017-18学年高中生物专题2微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数练习.docxVIP

1.测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。2．稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌数目低。3．为确保结果准确，一般选择菌落数在30~ 1.测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。 2．稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌数目低。 3．为确保结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板上进行计数。 4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作唯一氮源的选择培养基分离该细菌。 5．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，据是否变红进行判断。 筛选菌株的思路及计数 [自读教材·夯基础] 1．筛选菌株的思路 (1)自然界中目的菌株的筛选： ①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 ②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的。 (2)实验室中目的菌株的筛选： ①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。 ②方法：利用选择培养基分离。 a．选择培养基：允许特定微生物生长，同时阻止或抑制其他种类微生物生长的培养基。 b．实例：选择分解尿素的细菌的培养基，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。 2．统计菌落数目 (1)常用方法：稀释涂布平板法。 ①原理eq \b\lc\{\rc\ (\a\vs4\al\co1(a.当样品的稀释度足够高时，培养基表,面生长的一个菌落，来源于样品稀释液,中的一个活菌,b.通过统计平板上的菌落数来推测样品中,大约含有的活菌数)) ②计数原则：一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 ③结果分析：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 (2)其他方法：利用显微镜直接计数。 1．阅读教材P22第一段旁栏中的相关内容，并思考回答下列问题。 (1)从物理性质上划分，此培养基属于哪类培养基？从功能上划分呢？ 提示：固体培养基，因为加入了凝固剂琼脂。从功能上看属于选择培养基。 (2)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 提示：碳源主要是葡萄糖，氮源是尿素。 (3)该培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ 提示：该培养基对微生物有选择作用。该培养基以尿素为唯一氮源，只允许能以尿素作为氮源的微生物生长。 2．阅读教材P22中部楷体字部分，思考： 哪位同学的结果更接近真实值？他们的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？ 提示：第一位同学只涂布了1个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数值结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值，这两位同学的实验都需要改进。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致。结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 3．阅读教材P23上部的楷体字部分，请帮助A同学设置对照实验，以排除其他同学所质疑的可能影响实验结果的因素。 提示： 可能原因 实验验证 结　论 所取土样不同 其他同学用与A同学一样的土样进行实验 若结果与A同学的一致，则说明A无误；若结果与A同学的不一致，则说明A同学操作失误或培养基配制有问题 培养基污染或操作失误 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作空白对照 若有菌落出现，则说明培养基污染；若无菌落出现，则说明未被污染 [跟随名师·解疑难] 1．选择培养基的类型及作用 (1)在培养基中加入某种化学物质。如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。这里的加入指的是在培养基的培养成分的基础上加入。 (2)改变培养基中的营养成分。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。 (3)改变微生物的培养条件。如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。 2．统计菌落数目 (1)稀释涂布平板法： ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 ②注意事项： a．设置重复组：同一稀释度下，至少涂布3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。分析结果时，需考虑重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着