稻曲病菌真菌病毒的多样性研究植物病理学专业论文.docxVIP

分类号 分类号 密级 华中农业大学博士学位论文 稻曲病菌真菌病毒的多样性研究 Diversity of Mycoviruses Infecting the Plant Pathogen Ustilaginoidea virens 博士研究生： 江银辉 学 号： 2011301010045 指导教师： 黄俊斌教授 指导小组： 姜道宏教授 李国庆教授 罗朝喜教授 董五辈教授 候明生教授 专业：植物病理学 研究方向：分子植物病理学 获得学位名称：农学博士 获得学位时间：2014年12月 华中农业大学植物科技学院 二。一四年十二月 万方数据 lil lil lllHil llll lI HIlllllll Y2803496 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 否 如需保密，解密时间 年月日 是甭保密 独创性声明 本人声明所呈交酶论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他入已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了织确的说明，并表示了谢意。 研究蜷名：i-2麟 帆沙／争年／砂月7日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关予保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子 版，并提供哥录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编 学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文 的全部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换服务， 同对本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：保密学位论文(印涉及技术秘密、商业秘密威申请专桐等潜在需要提交保密的 论文)在解密后适用于本授权书． 黝嫦粼：卜觋 粼名“侧八 ．签名墨期：汐纷年，≯月7日 签名目期：≯，t，年嚏月7爵 万方数据 稻曲病菌真菌病毒的多样性研究目录 稻曲病菌真菌病毒的多样性研究 目录 摘要 I Abstract ． ．． ． ．． ．． ．．．．．． ．． ． ． ． ．．III 第一章文献综述 ．．1 1水稻稻曲病的研究概况 ．1 1．1稻曲病的危害及分布 1 1．2稻衄病菌生活史和病害循环 3 1．3稻曲病菌的致病过程 5 1．4稻曲病菌的遗传多样性 ． 7 1．5稻曲病菌分子生物学的研究 7 1．6稻曲病的防治 8 2真菌病毒研究概论 ．8 2．1真菌病毒的起源与复制 8 2．2真菌病毒的传播途径和方式 9 2．3真菌病毒的脱毒 ．．10 2．4真菌病毒的主要类群 ．．11 2．4．1真菌DNA病毒 11 2．4．2真菌dsRNA病毒 ．12 2．4．3真菌ssRNA病毒 ．14 2．4．4真菌逆转录RNA病毒 ．16 2．5真菌病毒对寄主的影响 ．．17 2．6同种真菌中真菌病毒多样性 一18 3本文研究的目的和意义 19 第二章稻曲病菌株中dsRNA的检测及分析 ．．20 l材料与方法 20 1．1培养基 ．20 1．2酶和试剂 ．20 1．3仪器和设备 ．21 万方数据 稻曲病菌真蕾病毒的多样性研究1．4稻曲病菌菌株的分离和收集 稻曲病菌真蕾病毒的多样性研究 1．4稻曲病菌菌株的分离和收集 一2l 1．5稻曲病菌菌丝的培养和收集 ．23 1．6 dsRNA提取及检测 ．23 1．7原生质体制备及再生 ．24 1．8利巴韦林脱病毒处理 ．24 1．9高温脱病毒处理 ．25 1．10分生孢子携带病毒检测 25 2结果与分析 25 2．1 198株稻曲病菌菌株所含dsRNA分析 ．25 2．2分生孢子携带病毒的频率 ．28 2．3原生质体再生菌株dsRNA检测 29 2．4利巴韦林和高温脱病毒处理 ．30 3小结与讨论 ．3l 第三章稻曲病菌株GX．1中真菌病毒的全长cDNA克隆与序列分析 35 1材料与方法 35 1．1菌株 ．35 1．2培养基及试剂 ．35 1．3酶和试剂盒 ．36 1．4载体和引物 ．36 1．5仪器和设备 一37 1．6总RNA的提取及DNA的去除 38 1．7 dsRNA提取 一39 1．8病毒全长序列的克隆 ．39 1．8．1随机引物cDNA克隆 39 1．8．2 dsRNA 5’一和3’一端克隆 ．40 1．8．3序列拼接和系统进化分析 42 1．9 Northern杂交 一44 1．9．1电泳、转膜及固定 44 1．9．2探针标记 45 万方数据 稻曲病菌真菌病毒的多样性研究1．9．3杂交 稻曲病菌真菌病毒的多样性研究 1．9．3杂交 45 1．9．4杂交信号的产生和