分子生物学习题集答案(1).doc

第一章 问答题 重组 DNA的含义是什么? = 1 \* GB3 \* MERGEFORMAT ①目的基因的获得。从细菌或动植物细胞中取出染色体的DNA，用内切酶将之切成若干片段，从中鉴定出目的基因。另一种方法是从细胞中分离到信使核糖核酸核(mRNA)用反转录酶的作用获得该基因的互补DNA(cDNA)。如果预先知道某种蛋白质的氨基酸顺序，可以破译它的遗传密码，用DNA合成的方法获得基因。 = 2 \* GB3 \* MERGEFORMAT ②运载体的选择。运载体一般为质粒，是细菌中染色体以外的DNA。但它不是正常的成分，即没有质粒也完全可以正常生长。质粒是环状的DNA，能自主复制，有若干内切酶切口和某些抗生素的抗药性基因。可以作为转基因的载体。 = 3 \* GB3 \* MERGEFORMAT ③内切酶切割。将目的基因与质粒DNA如pBR322质粒，用相同的内切酶分别进行切割，结果它们都会形成相同的切口。 = 4 \* GB3 \* MERGEFORMAT ④连接酶连接。DNA连接酶，常用的有T4。在三磷酸腺苷(ATP)及镁离子存在的条件下，T4连接酶能将切口相同的两种DNA连接起来，形成一个插入目的基因的质粒，叫重组质粒。 = 5 \* GB3 \* MERGEFORMAT ⑤宿主菌。宿主菌如大肠杆菌作为受体菌，需要培养到旺盛生长阶段，叫感受态细胞。一般在液体培养基中，37℃振荡培养过夜即可。 = 6 \* GB3 \* MERGEFORMAT ⑥重组DNA的转化。将插入目的基因的质粒加入呈感受态的大肠杆菌中，同时加入适当的钙盐(Ca+2)，振荡培养。大肠杆菌将重组质粒吞入胞内。这个过程叫转化。 = 7 \* GB3 \* MERGEFORMAT ⑦转化子的筛选。pBR322质粒的PstI酶切口处插入目的基因时，则会破坏了抗氨苄青霉素的基因。将转化后的大肠杆菌单个菌落，挑取菌体分别接种于含氨苄青霉素及链霉素的培养基中。如在链霉素培养基上生长而在氨苄青霉素培养基上不能生长的菌落即为转化子。 第二章 二、问答题 1.什么是细菌的限制—修饰系统(restriction-modificaton system, R-M system)，细菌的限制—修饰系统有什么意义? 即限制性内切酶和与其对应的甲基化酶系统，称R-M system。限制性内切酶识别特异的DNA序列并打断DNA，同时对应的甲基化酶能把该段特异的序列甲基化，使得限制性内切酶无法识别。 这种系统在细菌中起到了免疫的作用，即外来入侵的DNA在限制性内切酶的作用下被水解，而细菌自身的DNA在甲基化酶的作用下被保护起来。 2.何谓断裂基因( split gene)?何谓重叠基因( overlapping gene)?它们在生物进化与适应上有何意义? 重叠基因：不同基因共用一段相同的DNA序列。 断裂基因：真核生物结构基因，有若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因或间隔基因。 = 1 \* GB3 \* MERGEFORMAT ①重叠基因生物学意义： 原核生物进化的经济原则(较小的C值编码较多的基因信息)； 遗传信息量的估算、突变效应的鉴定、表达调控的理论发展； 丰富和发展了基因的概念(部分回答 C不等于c)。 = 2 \* GB3 \* MERGEFORMAT ②间隔基因的生物学意义： 有利于生物遗传的相对稳定。在突变随机发生的前提下，间隔基因的内含子突变不会承受自然选择压力； 增加变异概率，有利于生物的进化。间隔基因长度的增加在某种程度上与增加了基因内的重组变换概率，这样可形成蛋白结构域的重新组合； 扩大生物体的遗传信息储量。通过改变读码框或利用内含子编码基因，或对内含子以不同方式剪接； 利用内含子进行代谢调节。例：酵母细胞色素b基因内含子 = 2 \* ROMAN \* MERGEFORMAT II编码一个成熟酶，利用成熟酶切除未成熟的mRNA中的内含子。 3.什么是顺反子?用“互补”和“等位基因”说明“基因”这个概念。 4.IS元件整合到靶位点时会发生什么，IS元件整合到靶位点时会发生什么? IS元件的末端是反向重复序列，这两个重复序列高度同源，由供体提供IS元件的一个拷贝到靶位点，涉及酶切、复制、重组，即通过转座酶与末端IR和受体靶位点序列DNA双链进行特定长度的交错切割，再将IS元件连接到靶位点的凸出单链上，最后由聚合酶填补空缺完成转座。当IS元件整合到靶位点后，插入位点的宿主靶DNA序列被复制，在转座子两端产生宿主靶DNA序列的正向重复，因此IS DNA