sufu在神经嵴细胞来源的颅骨发育中的功能研究发育生物学专业论文.docxVIP

杭州师范，：学硕士学位论文 杭州师范，：学硕士学位论文 ‘／，厂f，在神经嵴细胞来源的颅骨发育中的功能研究 致谢 不知不觉我的研究生生活即将结束，我很庆幸能来到如此充满学习氛围的杭州 师范大学，也庆幸能加入张遵义老师的科研队伍里。回忆起这三年的点点滴滴，感 慨不已。这三年时间里，我学到了许多受益无穷的东西，遇到了很多良师益友，给 我很多指引和帮助，使我能够顺利的完成学业，在这里向他们表示最衷心的感谢。 首先要感谢我的导师张遵义老师。作为我的导师，他在实验技术以及做科研的 思维方式上给了我很大的指引和帮助。作为导师，他为我们点拨迷津；作为长辈， 对学生关怀备至；用他的言传身教，使我学到了许多书本上没有的东西，这也是我 获得的最宝贵的财富，我将深深的记在心里，作为我今后学习和工作的标准。 其次要感谢我的指导老师李建营老师。李老师在本课题实验路线设计上给了我 很多指导，时刻关心课题进展，及时纠正我的错误，他谨慎的科研态度深深地影响 着我。感谢李老师在实验上给予的指导和帮助，并对我的毕业论文提出宝贵的修改 意见，也要感谢李老师在生活上给予的关心和帮助。 三年的实验和生活中虽然会遇到很多困难，但因为有老师、同窗、师妹和师弟 们的陪伴，我的研究生生活变得更加温馨。感谢张晓芸、黄华荣、朱晓静、李斐雪 老师们的实验指导和帮助；感谢羊雪芹老师、李艳老师、缪小平、包美玲如挚友般 的关心和照顾；还要感谢师妹刘影、袁学燕、赵婉欣、王敏，师弟曹欢欢、许杰、 王中正、房郁坤、邵站的帮助和陪伴。衷心感谢实验室的每一个人，愿大家科研顺 利进行。 万方数据 杭州师范，7：学硕士学位论文 杭州师范，7：学硕士学位论文 q，厂f，在神经嵴细胞来源的颅骨发育中的功能研究 摘要 颅面畸形占所有人类先天性疾病的314，影。向了头部、面部和颈部的发育。颅 面部的六邵分骨骼都来源于颅神经嵴细胞，人类许多神经嵴病的临床症状也多与颅 骨的缺陷、畸形相关。研究一些重要神经嵴病的发生机制，解析胚胎发育过程中出 现异常的信号通路或关键调控因子，可以为这些疾病的产前诊断和干预等提供重要 的靶点和理论依据。以小鼠为模型的遗传学研究揭示了参与颅骨发育的重要信号通 路，主要包括Hh，Wnt，BMP，FGF，Notch等。本课题主要以Hh通路抑制因子曲而 基因的条件性敲除小鼠为模型研究其在颅神经嵴细胞来源的颅骨发育中的功能。我 们发现用物f_，一D‘P转基因小鼠在神经嵴细胞中条件性敲除勋而基因会导致所有神 经嵴细胞来源的颅骨都未发育，这表明Sufu可能是参与颅骨发育必需的调控因子。 利用R26R小鼠表达LacZ基因来标记、追踪神经嵴细胞，发现在突变体中神经嵴细 胞可以正常迁移至目的地。骨源性细胞的凋亡未出现明显的增加，但骨源性细胞增 殖显著减少，同时成骨细胞分化相关的重要因子Osterix和Runx2的表达基本被完 全抑制，表明了Sufu敲除造成的颅骨发育缺陷是由于抑制了骨源性细胞的增殖和 分化。为迸一步揭示蚰而敲除造成小鼠颅骨发育缺陷的分子机制，我们利用原位 杂交技术检测了Runx2上游转录因子Msxl、Msx2和#lx5的表达变化，发现这些基 因在突变体中的表达量均明显降低。同时，Hh通路的靶分子的表达显著上调，但 FGF，BMP通路分子包括Fgfr2，Bmp2等明显下调，Notch通路分子Jagl显著上调。 West ern bl ot分析发现在突变体中抑制形态的G1 i 3显著下降，而全长G¨2的表达 明显上调。通过遗传学实验发现在神经嵴细胞中同时敲除Sufu和G1 i 2可以挽救单 一Sufu突变的表型。以上结果表明，在颅骨发育中Sufu通过抑制全长Gl j 2蛋白 的产生并促进G】j 3蛋白的加工来抑制Hh通路活性，进而抑制FGF和BMP通路，促 进Xotch通路活性。这些与成骨细胞增殖和分化密切相关的信号通路的异常导致成 骨细胞分化因子的抑制以及细胞增殖的减少，并最终造成神经嵴细胞来源的颅骨未 发育。 关键i司：Sufu；颅面畸形；HH通路；神经嵴细胞；成骨细胞分化；遗传调控 万方数据 AbstractCraniofacial Abstract Craniofacial malformation accounled for 3／4 of all the human congenital diseases．which primarily influences head：neck and facial development．Most of the skull bones derived from the cranial neural cresl cell