wntβcatenin信号通路在大鼠蛛网膜下腔出血后柔脑膜纤维化中的作用神经病学专业论文.docxVIP

目 目 录 l Wnt／lj—catenin信号通路在大鼠蛛网膜下腔出血后柔脑膜 纤维化中的作用 1 1．1 中文摘要 1 1．2 英文摘要 3 1．3 前言 7 1．4 材料与方法 9 1．5 结果 16 1．6 讨论 27 1．7 结论． ．．36 1．8 参考文献 37 1．9 符号说明 44 2 致谢 46 3 wnt信号通路与纤维化(综述) 47 万方数据 四川医科大学硕士学位论文Wnt／13一catenin信号通路在大鼠蛛网膜下腔出 四川医科大学硕士学位论文 Wnt／13一catenin信号通路在大鼠蛛网膜下腔出 血后柔脑膜纤维化中的作用 摘 要 目的：建立大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)模型，检测SAH后脑脊液(CSF)qb PICP浓度的动态变化以及脑组织内Wnt3a、p-catenin蛋白的表达情况，探 讨Wnt／[3．catenin信号通路在大鼠蛛网膜下腔出血后柔脑膜纤维化中的作用， 为通过抗纤维化途径来治疗SAH后慢性脑积水提供更多的理论依据。方 法：1．采用“二次枕大池注血法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型。2．将75只 健康雄性SD大鼠随机分为三组：空白组(25只)、假手术组(25只)、 模型组(25只)。各组按时间点分为术后3d、6d、10d、14d和21d，5个亚 组，每个亚组5只大鼠。分别于术后相应时间点抽取各组大鼠脑脊液存放 备检测，以及固定取脑，石蜡包埋切片。3．于术后1d、3d、6d、10d、14d、 2 1 d观察各组大鼠一般情况并进行行为学检查评分，评价大鼠SAH模型是 否成功。4．将空白组、假手术组、模型组第2l天的大鼠脑组织切片进行 Masson染色，采用Motic image advances 3．2图像分析系统测量柔脑膜的 平均厚度和平均灰度值，并进行定量分析。5．采用放射免疫法检测空白组、 假手术组、模型组大鼠术后相应时间点脑脊液中PICP的浓度。6．免疫组织 化学法检测空白组、假手术组、模型组大鼠术后相应时间点脑组织中 Wnt3a、13-catenin蛋白的表达情况。结果：1．模型组大鼠精神萎靡，活动减 少，食欲下降；在术后1 d和3d，模型组大鼠的行为学评分结果明显低于 假手术组和空白组帜0．01)；而在6d、10 d、14 d、21d，各组大鼠的评分 万方数据 四川医科大1学硕士学位论支结果差异无统计学意义(胗0．05)。2．第21天大鼠柔脑膜Masson染色：模型 四川医科大1学硕士学位论支 结果差异无统计学意义(胗0．05)。2．第21天大鼠柔脑膜Masson染色：模型 组柔脑膜的平均灰度值显著低于假手术组和空白组，平均厚度显著高于假 手术组和空白组(PO．01)；模型组柔脑膜平均胶原纤维含量显著高于假手 术组和空白组(P0．01)。假手术组与空白组柔脑膜的平均灰度值、平均厚 度及平均胶原纤维含量差异无统计学意义p0．05)。 3．PICP浓度变化：模 型组各时间点CSF中的PICP浓度显著高于假手术组和空白组(尸0．01)。假 手术组与空白组间差异无统计学意义(胗0．05)。4．Wnt3a蛋白测定：模型组 在各时间点较同时间点假手术组和空白组Wnt3a的表达均有显著升高 (PO．01)，并与PICP浓度变化呈显著正相关(PO．01)。假手术组与空白组 间差异无统计学意义(胗0．05)。5．p．catenin蛋白测定：模型组在各时间点较 同时间点假手术组和空白组fi-catenin的表达均有显著升高帜0．0 1)，并与 PICP浓度、Wnt3a蛋白变化呈显著正相关(P0．01)。假手术组与空白组 间差异无统计学意义(P0．05)。结论：1．采取自体血二次枕大池注血法制作 大鼠蛛网膜下腔出血模型，实验相对简单，可操作性强，与人体蛛网膜下 腔出血的病理生理变化过程有一定相似性，是研究SAH后柔脑膜病理变化 较为理想的一种动物模型。2．蛛网膜下腔出血后脑脊液中PICP浓度升高， 提示柔脑膜发生纤维化。PICP浓度持续高表达与纤维化的严重程度相关。 而柔脑膜纤维化的不断发生和累积可能是导致SAH后慢性脑积水形成的 原因。3．Wnt3a、13-catenin蛋白在大鼠SAH模型中表达增加，且与脑脊液 中PICP浓度的升高呈正相关，提示Wnt／13．catenin信号转导通路的激活在 SAH后柔脑膜纤维化的发生发展及形成中可能发挥着重要作用。 关键词：SAH；柔脑膜纤维化；PICP；Wnt3a；13-catenin 万方数据 四川医科大学硕士学位论文The 四川医科大学硕士学位论文 The role of Wnt／p-catenin signaling pathway in leptomeningeal fibrosis in rats after subarachnoid h