susd2基因在肝细胞癌中表达及功能研究生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

硕士学位论文研究结果 硕士学位论文 研究结果 l、肝细胞癌相关基因的筛选及生物信息学分析：利用QOE软件筛选出共 同差异表达基因353个，其中共同上调基因171个，下调表达基因182个。运 用DAVID在线分析软件对这些差异基因进行功能注释和通路分析，发现这些基 因的主要功能与细胞凋亡、细胞粘附、氧化还原等有关，还与p53信号通路、 Jak．STAT信号通路等相关。对差异基因进行文献挖掘，首次发现SUSD2基因可 能与肝细胞癌有关。 2、SUSD2基因在8例新鲜临床样本中的表达水平分析：利用q-PCR和 Western Blot检测8例接受肝叶切除手术的患者标本以及对应癌旁正常肝组织中 SUSD2的表达情况，q-PCR结果显示：8例临床样本中，7例肝癌组织的SUSD2 mRNA表达水平显著低于对应的癌旁正常组织(尸O．05)。Western Blot结果显 示8例临床样本中，7例肝癌组织中SUSD2蛋白表达水平显著低于癌旁正常肝 组织，与q-PCR结果一致。 3、利用免疫组化检测SUSD2在180例肝癌及16例正常肝组织中的表达水 平以及细胞定位。结果显示：SUSD2蛋白主要分布在包浆和包膜。根据临床病 理资料(性别、年龄、pT、pN、pM、临床分期、组织学分级)绘制出的ROC 曲线，结果提示阳性表达的肿瘤细胞在所有肿瘤细胞数中所占比例超过52．5％ 为高表达。基于此最佳临界值，在大部分肿瘤组织样品中SUSD2呈现低表达 (112／180)，而在正常肝组织样品中呈现高表达(16／16)，两者具有统计学差异 (P=0．000)。进一步分析SUSD2表达量与临床病理特征间的关系，结果表明： SUSD2的表达量与pT分期(矛=33．1 75，P=o．ooo)、pN分期(矛=4．785，P= 0．029)、pM分期(矛=4．620，P=0．032)、病理分级(矛=5．198，P=0．023)、临床分 期(矛=30．244，P=o．ooo)有关，而与性别(x2=o．3 1，P=0．861)和年龄(矛=1．093， 尸=o．296)无显著相关性。 4、经Western Blot检测，瞬时转染了重组质粒pcDNA3．1．SUSD2的HepG2 细胞中SUSD2表达水平显著高于对照组，转染psi．mHl．SUSD2的SMMC7721 细胞中SUSD2的表达水平显著低于对照组。 TTT 万方数据 中文摘要5、CCK．8检测细胞增殖能力，实验结果显示：提高SUSD2的表达水后， 中文摘要 5、CCK．8检测细胞增殖能力，实验结果显示：提高SUSD2的表达水后， 能够对HepG2细胞增殖产生显著的抑制作用(P0．05)；降低SUSD2的表达水 平后能够对SMMC7721细胞的增殖产牛显著的促进作用(PO．05)。 6、流式细胞术检测SUSD2表达量的改变对细胞凋亡的影响，实验结果表 明，上调SUSD2的表达水平后HepG2细胞的凋亡数量与对照组相比显著增加(P O．05)，下调SUSD2的表达水平SMMC7721细胞的凋亡数量较对照组显著减少 (PO．05)。 7、划痕愈合实验结果表明，在过表达组，HepG2细胞迁移的相对距离较对 照组显著降低(PO．05)，在干扰组，SMMC7721细胞迁移的相对距离较对照组 显著增加(尸0．05)。 8、Transwell基质胶小室法检测细胞侵袭能力，结果显示：在过表达组，HepG2 细胞穿膜数较对照组显著减少(PO．05)，在干扰组，SMMC7721细胞穿膜数较 对照组显著增多(P0．05)。 结论 通过对两组基因芯片表达谱数据的生物信息学分析及文献挖掘，发现新的 肝癌相关基因SUSD2。 收集临床标本，分析SUSD2基因在临床标本中的表达 量，发现SUSD2低表达于肝癌组织而相对高表达于正常肝组织。进一步分析发 现SUSD2的表达水平与肝癌的发生发展相关，SUSD2表达量越低，癌组织分化 程度越低，临床分期越高。在牛物功能方面，分别建立了转染过表达载体和干 扰载体的HepG2细胞株和SMMC7721细胞株；证明了上调SUSD2的表达量能 显著抑制细胞的增殖能力，抑制细胞的迁移和侵袭能力、促进细胞的凋亡；下 调SUSD2的表达量能显著促进细胞的增殖、促进细胞侵袭和迁移能力，抑制细 胞的凋亡。综合以上实验，SUSD2参与了肝癌的发生发展，且可能作为抑癌基 因发挥作用，为进一步理解肝癌的分子机制提供了新的视角，也为肝癌的诊断 及治疗提供了新的研究靶点。 关键词肝细胞癌 SUSD2临床病理特征生物功能 IV 万方数据 硕士学位论文Expressions 硕士学位论文 Expressions and Function ofOl U lO i。n Hepatocellular carcinoma Name：Li