微生物限度检查操作规程2015版中国药典四部.docVIP

微生物限度检查操作规程（中国药典2015版四部通则） 一、霉菌和酵母菌总数、控制菌的检查。 二、引用标准:《中药典》 二、引用标准: 《中 药典》2015年版（通则1105-1106） 三、目录 1?微生物限度标准 2?设备、仪器及用具 3?消毒液、稀释剂、试液及培养基 4 ?检查总则（通则1105 :非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法，通则1106非无菌产品微生 物限度检査：控制菌检査法 5?微生物计数法检查 6?控制菌检查法 实验技术 附件 4?微生物限度标准 非无菌药用原料及辅料的微生物限度标准 （4）目测霉变者以不合格论。（2）“无”为标准依据或无相应规定。 2?设施、仪器及用具 2.1设施 2.1.1?微生物限度检查室及相关设施：微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。检验全 过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。 ?其他设备：高压蒸汽灭菌器；细菌培养箱（30?35°C ）;蟹菌培养箱（25?28°C ）;电炉（或 其他适宜的加热装置）；恒温水浴；电热干燥箱（250~300°C ）;电冰箱。生化试剂储存箱。 2.2仪器及器皿 2.2.1?菌落计数器；显微镜（1500X ）;电子天平或药物天平（感量0.1g ） ; pH系列比色计。 ?玻璃器皿：锥形瓶（250?300ml ,内装玻璃珠若干）、研钵（玻璃或晦瓷制，00?42cm ）、 培养皿（（p9 cm ） v量筒（100 ml）、试管（18x180mm ）及塞、吸管（1ml分度0.01 , 40 ml分 度0.1 ）.载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）。 2.2.3新购的玻璃器皿的清洁：先用流水冲洗，浸泡于4%?2%盐酸（工业用）液中约2?6小时， 除去游离碱质，再用流水冲洗。用于化学分析的玻璃仪器，需用重铅酸钾清洁液浸泡数分钟后，再用 流水冲洗，最后以纯化水涮洗2?3次，晾干备用。 2.3用过的玻璃器皿 2.3.1未被病原微生物污染的器皿：可随时洗涤。用清水冲洗（或浸泡），除容量仪器外，可用毛刷 和肥皂粉，内外刷洗，再用清水涮洗干净,晾干备用。容量仪器宜用清洁液浸泡或涮洗，再用流水冲 洗，最后以纯化水涮洗2?3次。 2.3.2试管及培养皿：先正放或直立于高压蒸汽灭菌器内，经424乜灭菌30分钟。趁热倾出培养物， 再以清水或用毛刷及肥皂粉刷洗，最后以流水涮净。 2.3.3吸管：全部直立浸没于清洁液的长筒形容器中，筒底应衬有棉或橡皮垫，以防管尖损坏。24小 时后，逐支用流水反复冲洗洁净,晾干后包扎灭菌备用。 2.3.4载、盖玻片：应分别浸泡于清洁液42?24小时后，取出用流水冲洗，再放入3%?5%肥皂水 或5%碳酸钠液内煮沸10-15分钟，待自然冷却后，再用流水冲洗。沥干后置95%乙醇中浸泡，晾 干备用。 2.3.5玻璃器皿用前应洗涤干净， 2.3.5玻璃器皿用前应洗涤干净，无残1 抗菌物质。吸管口上端距0.5 cm处塞入约2cm的适宜疏松 棉花，置吸管桶内或牛皮纸袋中。锥形瓶、童筒、试管均应加棉塞或硅胶塞，若用振荡器制备混悬液 时，尚需用玻璃纸包裹瓶塞（以免振荡时供试液污染瓶塞），再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于160°C 干热灭菌2小时或高压蒸汽42*C灭菌30分钟，烘干备用。 2.4用具 2.4.1大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用70%~75%乙醇溶液浸泡）。 2.4.2无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。也可用一次性无菌衣、 帽、口罩、手套。 2.4.3接种环（白钛金或標铅合金，环径4?5mm.长度6?10cm）.乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、 灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌镇子、灭菌称样纸、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、白瓷盘、洗 手盆、陶瓦盖（42 cm ）、实验记录纸等。 3消毒液、稀释剂、试液及培养基 3.1消毒液、稀释剂及试液。 3.1.1 0.1%苯扎漠鞍溶液：供洗手、擦拭操作台面用。 5%石碳酸溶液：配制后装入玻璃消毒缸内，供消毒带菌吸管用，抑或选用其他适宜消毒液。 擦拭操作工具用。3.1.3?75%乙醇溶液：配好后制乙醇棉球，供擦手、 擦拭操作工具用。 3.1.4?0.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g ,加水使溶解成1000ml , 121°G灭菌20分钟。 3.1.5?司?a.t-80. 3.1.5?司 ?a. t-80.单硬脂酸甘油酯、吐温?80:供非水溶性供试品供试液制备用。 3.1.6 ?无菌 0.1% 氯化三苯四氮哩溶液（TTC ）:取氯化三苯四氮瞠0.1g ,加水使溶解成10 mb 3.1.7 .甲基红指示液：取甲基红0.1g ,加入95%乙醇300ml ,水适量，使溶解，再加水至500m