乳腺癌细胞ngf信号通路抑制性多肽适配体筛选生理学专业论文.docxVIP

邹 邹 丽 娟 硕 士 学 位 论 文 答 辩 委 员 会 成 员 名 单 姓姓名名 职 称称 单 位位 备 注注 吴吴自荣荣 教 授授 华 东 师 范 大 学学 主 席席 钱钱 星星 教 授授 华 东 师 范 大 学学 博 导导 黄黄 静静 副 教 授授 华 东 师 范 大 学学学 杜杜 冰冰 讲 师师 华 东 师 范 大 学学 答 辩 秘 书 华 华 东 师 范 大 学硕 士 学位 论 文 中 文 摘 要 摘 要 目 的 研究乳腺癌 M cF 一7 细胞中神经生长因子(ne rve growth fac tor，N J )信号通 路 ， 筛 选 抑 制 乳 腺 癌 细 胞 增 殖 的 多 肤 适 配 体 ，从 而 探 索 治 疗 乳 腺 癌 的 潜 在 靶 点 。 方 法 运用免疫荧光与蛋白质印迹 (we stem blo tting ) 检测 N GF 及其高亲和力受 体 T rk A (酪 氨 酸 激 酶 受 体 A ) 在 M C F 一7 细 胞 中 的 表 达 ; 运 用 细 胞 计 数 方 法 (cell co unt ing kit一8 ， C C K 一8) 检 测 不 同浓 度 的 N G F 阻 断 剂 R o 08 一2 7 50 和 酪 氨 酸 酶 阻 断 剂 K2 52 a 对 细 胞 增 殖 和 存 活 的 影 响 ;运 用 w estem blotting 检 测 不 同 浓 度 Ro 08 一2 7 50 处 理 后 的 细 胞 表 达 活 性 促 分 裂 素 原 活 化 蛋 白激 酶 (acti ve 一m itog en 一activated p rotein kin ases ，active 一M A p K ) 与 p 53 蛋 白变 化 情 况 ; 运 用 流 式 细 胞 仪 检 测 不 同浓 度 Ro 08 一2 75 0 处 理 后 的 细 胞 凋 亡 情 况 以及 细 胞 周 期 分 布 的变 化 ; 运 用 多 肤 适 配 体 技 术 将 5 种 特 异 性 结 合 Ra s 蛋 白不 同位 点 的 多 肤 适 配 体 转 染 M C F 一7 细 胞 ， 并 运 用 C C K 一8 法 检 测 M C F 一7 细 胞 转 染 后 的增 殖 情 况 ，运 用 we stem blotting 检 测 表 达 active 一M A p K 蛋 白与 p 53 蛋 白 的 变 化 ， 以及 运 用 流 式 细 胞 仪 检 测 细 胞 凋 亡 情 况 。 结 果 实验结果显示 M cF 一7 细胞同时表达 N GF 及其受体 T奴 蛋白; N GF 阻断 剂 R 。08 一2 750 能 够 明显 地 抑 制 细 胞 增 殖 与 存 活 ，并 具 有 剂 量 效 应 ; 经 不 同浓 度 Ro 08 一2 75 0 处 理 细 胞 后 p 一E 双 1/2 表 达 量 上 调 ，p 53 表 达 下 调 ， 细 胞 出现 凋 亡 峰 ，并 出现 S 期 细 胞 含 量 上 升 ，G Z 期 细 胞 含 量 下 降 ; 转 染 的 5 种 多 肤 适 配 体 中 ，p P E R3 9R 能 明 显 抑 制 细 胞 的 增 殖 和 存 活 ， p 53 的 表 达 上 调 ， 并 出 现 显 著 的 凋 亡 峰 ， 然 而 p P E R3 9R 对 正 常 背 根 神 经 节 细 胞 D R G (do rsal roo t g an sli on ) 细 胞 没 有 任 何 抑 制 作 用 。 结 论 乳腺癌 M cF 一7 细胞中存在 N GF 信号通路，当使用特异性的N GF 阻断剂 Ro 08 一27 50 处 理 ， M C F 一7 细 胞 的 增 殖 和 存 活 受 到 明 显 抑 制 ， 出 现 S 期 停 滞 与 细 胞 凋 亡 ; 通 过 对 结 合 R as 的 的 多 肤 适 配 体 的 筛 选 ，p P E R3 9R 可 以 明 显 抑 制 M c F 一7 细 胞 的 增 殖 与 存 活 且 引 起 细 胞 的 凋 亡 ，这 个 结 果 可 能 与 引起 p 53 上 调 有 关 。并 且 PP E R 3 9