对两个usher综合征家系的ush2a基因的初步检测眼视光学七年制专业论文.docxVIP

对两个Usher综合征家系的USH2A基因的初步检测 对两个Usher综合征家系的USH2A基因的初步检测 中文摘要 目的：观察两个Usher综合征患者家系的临床特征，并进行致病基因USH2A的 初步检测。 方法： 1．对Usher综合征的家系进行病史询问，绘制家系图，并对入选的家系成员抽 取3ml外周静脉血用于基因组DNA的抽提； 2．使用血液基因组DNA提取系统提取两个Usher综合症患者家系中四名患者的 DNA，并冷藏保存于4。C； 3．采用聚合酶链反应(PCR)法，对提取出的DNA的USH2A基因的外显子2到外 显子21分别进行扩增； 4．用AxyPerp PCR清洁试剂盒对扩增后的产物进行纯化，通过DNA测序技术对 USH2A基因的外显子2到外显子21片段检测； 5．运用Mutationsurveyor软件和FinchTV软件对样本DNA序列进行分析，查找 是否存在突变，采用Polyphen2对突变位点的致病性进行分析。 结果：USH-A和USH-B家系四名患者表现为双眼自幼夜盲，听力渐进性下降(轻 度神经性耳聋)，眼底呈典型的视网膜色素变性的改变：视网膜血管狭窄，视盘 呈蜡黄样改变，周边视网膜有骨细胞样色素沉着；没有严重语言功能障碍，没有 前庭功能的异常，无连续遗传现象，符合USH2型的诊断标准。在外显子2到外 显子21片段中，共发现5种碱基突变。第373位的核苷酸纯合突变(C．373GA)， 第504号位点核苷酸纯合突变(C．504AG)，第4457号位点的核苷酸有杂合的错 义突变(C．4457GAG)，第897位点发现一杂合突变(c．897TGT)，第1419号位 点发现一杂合突变(c．1419CCT)。但这几处的突变均不致病，且已有报道，属 于单核苷酸多态性(SNP)位点。 结论：对两个Usher综合征家系的基因突变位点分析，在USH2A基因的外显子2 到外显子21片段中并未发现致病突变，亦未发现欧美人群中最常见的2299delG 突变，可能与Usher综合征的遗传异质性有关。中国人和欧美人的常见突变位点 不同，推测导致该家系患者Usher综合征临床表现的突变可能位于USH2A的其 他外显子或其他致病基因中。在四名患者基因中均发现C．373GA和c．504AG， 推测这为中国人群中的SNP位点中的热点突变。对中国人Usher综合症的基因突 变频谱还需进一步的研究。 关键词：Usher综合征；USH2A基因；PCR：SNP：突变 Screening Screening USH2A gene in the patients of two Chinese Usher syndrome families Abstract Objective：To observe the clinical feature of two Chinese Usher syndrome families and to screen USH2A gene in the patients． Methods： 1．Based on family history and medical examination of two Chinese Usher syndrome pedigrees，decide inheritance mode and clinical diagnosis．Collect 3ml peripheral blood from patients． 2．Relaxgene blood DNA system Was used for extracting genomics DNA according to the recommended protocol，and the DNAs were preserved in 4C． 3．The exons 2～2 1 of USH2A gene were amplified by PCR using standard protoc01． 4．Purificate the PCR products by AxyPerp PCR clean kit．Exon 2～2 1 of the USH2A gene were subjected to direct Sanger sequencing。Using Mutation Surveyor and FinchTV programms to analyze the DNA sequence and to identify the genetic variances．Finally,Polyphen2 Was used to determine the pathogenicity of the sequence variances． Re